Раздел медицины:

Офтальмология

Возрастные изменения мукополисахаридов в тканях глазного яблока

16 Февраля в 8:51 612 0

Роговица

Результаты проведенного гистохимического исследования показали, что ткань роговицы чрезвычайно богата мукополисахаридами почти во всех возрастных периодах жизни, ибо вся масса мукополисахаридов сосредоточена в ее соединительнотканной основе, состоящей из волокнистых структур и так называемой межуточной субстанции.

В наших наблюдениях, относящихся к разным возрастам, при различных значениях рН удалось констатировать в строме роговой оболочки резко положительную метахроматическую реакцию (++++) толуидиновым синим.

Строма роговицы окрашивается диффузно в красно-фиолетовый цвет. Такая метахроматическая окраска мало уменьшалась после предварительной ее обработки гиалуронидазой. Последнее обусловливается присутствием в строме роговицы кератосульфата, на который не действует указанный фермент. При значениях рН = 3,4 выявлялась слабая метахромазия, связанная с реакцией карбоксильных групп.

На это указывают результаты методов метилирования и деметилирования роговицы, что позволяет считать, что метахроматическая окраска толуидиновым синим происходит в основном за счет сульфатных групп, так как после деметилирования, т. е. восстановления карбоксильных групп, была получена слабая метахромазия. Эти результаты еще раз подтверждают известные данные о том, что роговица содержит преимущественно сульфатированные мукополисахариды. В лимбе реакция метахромазии не выявлялась.

При использовании ШИК-реакции в различном возрасте в строме роговицы обнаруживалось диффузно-красное окрашивание и более бледное окрашивание других ее слоев. Контрольные исследования с ацетилированием давали отрицательный результат, что говорит о наличии нейтральных мукополисахаридов.

При использовании ШИК-реакции одновременно с мукополисахаридами в клетках эпителия роговицы выявляется большое количество гликогена, поэтому для уточнения относительного содержания нейтральных мукополисахаридов использовались контрольные исследования ШИК-реакции с амилазой слюны, к которой чувствительны глыбки гликогена и не чувствительны диффузно окрашивающиеся мукополисахариды.

На окрашенных контрольных препаратах был виден красно-фиолетовый фон цитоплазмы эпителиальных клеток, которые содержали мукополисахариды.

Боуменовая оболочка, строма, десцеметовая оболочка н клетки эндотелия также давали диффузное окрашивание. Снижение метахроматической окраски, которое имело место в наших случаях, относилось к возрасту от 51 до 70 лет.

Такое ослабление окраски следует связать с нарушением тканевого обмена вещества, лежащего в основе старения всего организма. В возрасте более 60 лет интенсивность метахроматической окраски в роговой оболочке повторно усиливалась (вторичная метахромазия).

Последнее доказывалось контрольными исследованиями гиалуронидазой и метилированием, которые не полностью устраняли окраску. Это говорит о возможном нарастании концентрации кератансульфата, па который не действует указанный фермент.

При окраске препаратов альпиановым синим в роговице всех возрастов отмечалось синее окрашивание (++++). При различных значениях рН не наблюдалось резкой разницы в интенсивности окраски. Только в небольшом числе случаев в возрасте от 51 до 60 лет имело место уменьшение интенсивности метахромазии до (++).

Склера

При гистохимическом исследовании на мукополисахариды склеры новорожденных и подростков до 15 лет при рН = 5,6 в большинстве случаев выявлялась метахромазия в (+ и ++). При рН=3,4 метахроматическое окрашивание выявлялось в (+) или едва окрашивались (±), что говорит о преимущественном количестве в склере хондрнатинсульфатов (известно, что склера содержит хондрнатинсульфат А, В и С). Окраска альциановым синим давала топографически сходное окрашивание с толуидиновым синим.

ШИК-положительная реакция в основном была в виде розового (++) и пурпурного (+++) цвета. При окрашивании препаратов склеры толуидиновым синим в возрасте от 16 до 30 лет в отличие от предыдущей группы нами констатировано усиление метахромазии при рН = 5,6 в виде интенсивной (+++) и менее интенсивной (++) окраски (первичная метахромазия). Окраска при рН = 3,4 оставалась прежней.

Аналогичное усиление реакции отмечалось при окраске препаратов альциановым синим. ШИК-положительные структуры повышали интенсивность окрашивания от (+++) до (++++). Усиление интенсивности ШИК-реакции говорит об увеличении количества мукополисахаридов, по-видимому, нейтральных.

Сульфатирование срезов приводило к усилению метахромазии. При обработке препаратов тестикулярной гиалуронидазой и метилировании у детей, подростков и В возрасте от 16 до 30 лет полностью устраняли метахромазию деметилирование восстанавливало окраску метахромазии. Альцианофильные вещества описанной группы исчезали после 6 часов обработки препаратов в растворе гиалуронидазы.

В возрасте от 31 до 50 лет по сравнению с предыдущей группой при pН = 3,4 метахромазия едва выявлялась (±), а при pН = 5,6 интенсивность метахроматической окраски препаратов повышалась до (+++ и ++).

Окраска альциановым синим снижалась до голубой (++) и слабо-голубой (+). Контрольные исследования с гиалуронидазой и метилирование не полностью устраняли нетахроматическое окрашивание.

Деметилирование давало неравномерное окрашивание. ШИК-положительные структуры окрашивались преимущественно в пурпурный (+++) и ярко-пурпурный цвета (++++). ШИК-позитивные структуры не снимались после обработки в растворе гиалуронидазы и амилазы, а исчезали только после обработки и растворе пиридина.

Альциан-положительные структуры исчезали после 14-часовой обработки препаратов в растворе гиалуронидазы.

Степень метахроматического окрашивания склеры в возрасте от 51 до 70 лет и выше при рН = 3,4 в основном становилась высокой (+++ и ++++), продолжая нарастать с увеличением рН.

В этих же наблюдениях отмечалось усиление окраски альциан-положительных структур (вторичная метахромазия).

Изменения химического состава коллагеновых пучков сказывались и на состоянии нейтральных мукополисахаридов, которые в указанном возрасте резко повышали свою окраску до (+++ и ++++).

Исследования с тестикулярной гиалуронидазой и метилирование метахромазию не устраняли, что, по-видимому, связано с еще большим накоплением хондонатипсульфата В. Деметилирование изредка давало слабую метахромазию.

В возрасте от 51 до 70 лет и выше шло повторное увеличение количества кислых мукополисахаридов (окраска толуидиновым синим). При анализе материала мы нашли, что коллагеновая ткань склеры в пожилом возрасте, по сравнению с молодым, отличается своим физико-химическим составом. Следует заметить, что важным фактором, определяющим метахромазию, является степень се полимеризации. Высокополимеризированные кислые мукополисахариды дают положительную реакцию и, наоборот, низкополимеризированные являются резко ШИК-положительными.

Сосудистый тракт

Полученные данные показывают, что в группе умерших — у новорожденных, а также у детей и подростков до 15 лет окраска на кислые мукополисахариды в строме радужной оболочки и цилиарного тела в большинстве случаев при pН = 3,4 колебалась от менее интенсивной (++) до интенсивной (+++) метахроматической окраски, которая изменялась при рН = 5,6; при этом степень окрашивании расценивалась в (+).

Беспигментный эпителий цилиарного тела и цилиарных отростков во всех случаях обнаруживал резко интенсивную (++++) и интенсивную (+++) метахромазию при рН = 3,4; при рН = 5,6 давал также интенсивную метахромазию.

Способность ткани давать метахромазию при низком значении рН говорит о наличии в сосудистом тракте мукополисахаридов кислого порядка типа гиалуроновой кислоты. В сосудах среднего, мелкого и крупного калибра всего сосудистого тракта метахромазия была в пределах (+++) и (++) при рН = 3,4, а при рН = 5,6 колебалась от следовой (±) до (+) окраски.

В адвентции кислые мукополисахариды не определялись. Контрольные исследования с тестикулярной гиалуронидазой в срезах глаз новорожденных детей и подростков показали, что содержание гиалуроновой кислоты значительно преобладает над содержанием хондриатин-сульфата А и С. При сульфатировании метахромазия усиливалась за счет кислых карбоксильных групп. Деметилирование обнаруживало неравномерную метахромазию, а гиалуронидаза и метилирование полностью устраняли окрашивание.


В указанной возрастной группе при окраске препаратов сосудистого тракта альциановым синим оказалось, что в большинстве случаев в строме радужной оболочки, цилиарного тела и вокруг сосудов окраска имела голубой (++) и бледно-синий цвет. Альциан-положительные структуры исчезали после 6-часовой обработки срезов тестикулярной гиалуронидазой.

ШИК-положительные вещества в этой группе в строме радужной оболочки и цилиарного тела в основном выявлялись в виде волокнообразных структур и имели бледно-розовую окраску (+). В остальных случаях ШИК-положительные структуры едва окрашивались. В беспигментном эпителии только в единичных наблюдениях выявлялись ШИК-позитивные структуры (+). В большинстве же случаев реакция имела результат (±).

В сосудах ШИК-положительный слой очень топок с интенсивностью окраски в (+). Выявляемые ШИК-положительные структуры не снимались гиалуронидазой и амилазой слюны. После блокады альдегидных и 1,2-гликольных групп мы не получали ШИК-положительного окрашивания.

С увеличением возраста, именно в период от 16 до 30 лет, отмечалось усиление метахроматической окраски. В строме радужной оболочки до (+++ и ++++) и цилиарного тела интенсивность окраски колебалась от (+++) до (++++) при рН = 3,4 а при рН = 5,6 окраска оставалась прежней (+).

Беспигментный эпителии при рН = 3,4 имел интенсивную метахромазию (++++), а при рН=5,6 в (+).

Аналогичное метахроматическое окрашивание в (+++ и ++++) наблюдалось вокруг сосудов в сосудистой оболочке при рН = 3,4. В адвентиции метахромазия не обнаруживалась. Тестикулярная гиалуронидаза и метилирование полностью устраняли метахромазию.

При деметилировании наблюдалось равномерное интенсивное метахроматнческое окрашивание, что указывает на преобладание в тканях сосудистого тракта кислых мукополисахаридов, подверженных действию гиалуронидазы.

При окраске препаратов альциановым синим в большинстве случаев выявлялось повышение интенсивности окраски стромы радужной оболочки и цилиарного тела от бледно-голубого (++) до синего (++++) цвета во всех тканях сосудистого тракта.

Гиалуронидаза снимала окраску после 8-часовой обработки препаратов. ШИК-положительные структуры, которые относились к нейтральным мукополисахаридам, в соединительнотканной строме радужной оболочки и цилиарного тела и вокруг сосудов обнаруживались в виде бледно-розового (+) и розового (++) окрашивания. Только в радужке и в цилиарном теле отмечалось усиление интенсивности ШИК-реакции от пурпурной (+++) до ярко-пурпурной (++++) окраски.

Обработка срезов гиалуронидазой не снимала окраски. Реакция с пиридином окрашивания не давала.

В период от 31 до 50 лет из 29 случаев при рН = 3,4 метахроматическое окрашивание радужной оболочки и цилиарного тела имело неравномерный характер, чаще с тенденцией к уменьшению интенсивности метахромазии до (++ и +), а при рН = 5,6 метахромазия несколько усиливалась до (++). Метахромазия радужной оболочки и стромы цилиарного тела при рН = 3,4 оставалась высокой (+++; ++++).

В сосудистой оболочке при рН = 3,4 интенсивность окраски стенок сосудов резко уменьшалась и представлялась в виде слабой и менее интенсивной метахромазии в (+ и ++), а при рН = 5,6 реакция метахромазии выражалась (+).

Следует отметить, что вокруг облитериронанных и склерозированных сосудов метахромазия при обоих значениях рН усиливалась. В беспигментном эпителии цилиарного тела интенсивность окраски при рН = 3,4 несколько уменьшалась, становясь менее интенсивной (++), а при рН = 5,6 достигала (+++). В исследуемых тканях изредка реакция с пикрофуксином выявляла бледную окраску на проколлаген.

При сульфатировании срезов радужной оболочки и цилиарного тела, а также в стенках сосудов метахроматическое окрашивание в указанном возрасте становилось неравномерным. Тестикулярная гиалуронидаза и метилирование в срезах не полностью устраняли метахромазню. Деметилирование срезов вело к едва уловимому окрашиванию.

При окраске срезов альциановым синим со значением рН = 3,4 отмечалось значительное снижение окраски в строме радужной оболочки, а в цилиарном теле выявилась однородная бледно-голубая окраска в (++ и +), которая при рН = 5,6 принимала бледную окраску (+). Аналогичное снижение реакции наблюдалось в сосудах всего сосудистого тракта.

При проведении контрольной реакции с тестикулярной гиалуронидазой альциан-положительные вещества исчезали после обработки срезов в течение 18 часов.

ШИК-положительные структуры выявляли отчетливую разницу в интенсивности окраски. Наиболее наглядно эти колебания были выражены в строме радужной оболочки и цилиарного тела, где ШИК-положительные вещества в большинстве случаев в строме радужной оболочки и в цилиарном теле были представлены в виде пурпурного (+++) и ярко-пурпурного окрашивания (++++). В остальных случаях интенсивность окраски была слабая (++ и +). В гиалинизированных сосудах и в адвентиции окрашивание принимало пурпурный и ярко-пурпурный цвет (+++ и ++++).

В клетках цилиарного эпителия ШИК-положительные вещества выявлялись в виде пурпурной окраски (+++). а в остальных случаях окрашивание не превышало (++). Гладкая мускулатура сосудов заменялась фиброзной тканью, дающей ШИК-положительную реакцию.

После воздействия на срезы фермента амилазы последующая реакция ШИК в большинстве случаев была отрицательной. При обработке препаратов пиридином получалась слабая ШИК-реакция. Такое разнообразие в интенсивности окраски и в выявляемости мукополисахаридов в указанном возрасте наводит на мысль о нарушении с возрастом мукополисахаридного комплекса типа гиалуроновой кислоты — гиалуронидазы, который необходим для нормального функционирования тканей сосудистого тракта.

В возрасте от 51 до 70 лет и выше в строме радужной оболочки и цилиарного тела из 29 случаев в большинстве метахромазия при рН = 3,4 опять давала интенсивную (+++) и резко интенсивную (++++) метахромазию (вторичная), а при рН = 5,6, по сравнению с предыдущей возрастной группой, значительно усиливалась, достигая интенсивности метахромазии до (+++).

Последнее говорит об увеличении количества сульфатированных мукополисахаридов типа В, о чем свидетельствует усиление метахромазии при рН = 5,6.

Метахроматическая окраска при всех значениях рН оставалась слабой (+ и ++), что указывает на явное уменьшение количества кислых мукополисахаридов всех типов.

В сосудах, особенно в облитерированных и склерозированных, при рН = 3,4 метахроматическая окраска характеризовалась (+++ и ++++), а при рН = 5,6 была в пределах (++ и +++).

При сульфатировании срезов радужной оболочки и цилиарного тела метахроматическое окрашивание стромы усиливалось, а при слабо выраженной метахромазии окрашивание становилось едва уловимым. Это, по-видимому, связано с общим уменьшением количества кислых мукополисахаридов и накоплением в строме белковых веществ типа проколлагена. Последние по ван-Гизону давали яркую окраску.

Тестикулярная гиалуронидаза и метилирование в срезах радужной оболочки и цилиарного тела не устраняли метахроматического окрашивания (в связи со «вторичным накоплением» мукополисахаридов типа В) или устраняли частично. Деметилирование срезов изредка выявляло едва уловимое метахроматическое окрашивание, а в большинстве случаев оно сохранялось полностью.

Альцианофильные вещества в старческом и престарелом возрасте в соединительнотканной основе радужной оболочки и цилиарного тела опять принимали бледно-синее (++) и синее (+++) окрашивание. В беспигментном эпителии и вокруг утолщенных и облитерированных сосудов альцианофильные вещества резко усиливали окраску.

Следует отметить, что в тех случаях, когда в исследуемых тканях окрашивание было наиболее интенсивным (++++), гиалуронидаза несколько снижала интенсивность реакции.

Неразрушенные ШИК-положительные структуры следует, по-видимому, отнести к нейтральным мукополисахаридам.

Мелик-Асланова П.С., Алиева З.А.
Похожие статьи
показать еще