Диагностика отомикоза. Морфологическое строение полученных чистых культур

04 Мая в 15:57 1171 0


Морфологическое строение полученных чистых культур изучают на агаровых и жидких сусловых средах. При этом учитывают морфологию колоний на сусло-агаре: форму поверхности (гладкая, морщинистая), цвет (белый, кремовый, коричневый), консистенцию (кожистая, сметанообразная), характер края колоний (ровный, бахромчатый, врастающий в среду и пр.), характер роста на жидком сусле, наличие пленки или пристеночного кольца на поверхности среды, мути, осадка. Затем изучают морфологию элементов грибов (мицелия, бластоспор) через 48 ч роста па жидком сусле.

Определяют форму бластоспор, их размеры, характер почкования, характер ветвления мицелия, наличие хламидоснор и пр. Биохимические свойства грибов определяют по характеру сбраживания Сахаров (газообразование): глюкозы, мальтозы, галактозы, сахарозы и лактозы, характеру ассимиляции тех же Сахаров на синтетических средах, где эти сахара являются единственным источником углеводного питания грибов; характеру ассимиляции некоторых источников азота (NH4)2S04, пептон, мочевина, KN03]. На основании полученных таким образом сведений о морфологических и биохимических свойствах определяемого гриба производится его идентификация по определителю [Кашкин П. Н„ Шеклаков Н. Д., 1978; Lodder N. W., 1970].

С точки зрения установления видовой специфики флоры, вызывающей микотическне отиты, представляет интерес сравнение ее со случайной грибной флорой кожи наружного слухового прохода, выявляемой при наружных отитах другой этиологии. С этой целью мы проводили микологические исследования у 586 больных наружными отитами негрибковой этиологии. При микроскопическом исследовании нативных препаратов, полученных от этих больных, элементы грибов не были обнаружены ни в одном случае.

Культуральная диагностика

При культуральной диагностике у 64 больных были выделены культуры различных плесневых и дрожжеподобных грибов рода Candida. Важно, что при этом у всех больных в посевах были получены лишь единичные колонии грибов — одна-две колонии на три-четыре засеянные пробирки. Следует также отметить, что если в посевах материала от больных отомикозом были однородные культуры, то в посевах материала от больных негрибковыми наружными отитами — разнородные культуры грибов.

Таким образом, отрицательные результаты неоднократных микроскопических исследований нативного материала, получение единичных, часто разнородных культур грибов, относительная нехарактерность клинической картины не дали нам возможности расценивать выделенные у этих 64 больных грибы как возбудители отомикоза. У 64 больных этой группы в посевах были выделены сочетания различных грибов, как дрожжеподобных, так и плесневых. Из дрожжеподобных грибов рода Candida чаще выявляли С. albicans, С. stellatoidea, С. krusei, а из плесневых — A. niger, A. glausns, A. fumigatus, P. notatum, P. puherulum. Таким образом, установлено, что в наружном ухе больных негрибковыми отитами встречаются в основном те же виды грибов, что и у больных отомикозом. Это еще раз подтверждает факультативную природу грибов.

Мы провели также микологические исследования флоры наружного уха 60 здоровых люден. В эту группу были отобраны пациенты без каких-либо воспалительных заболевании наружного или среднего уха. У всех 60 человек при микроскопическом исследовании ушной серы элементов грибов не было обнаружено. При посевах (серы, слущешюго эпидермиса) на элективные питательные среды у 7 здоровых люден из 60 были получены единичные разнородные колонии плесневых грибов родов Aspergillus, Penicillium и в одном случае — Mucor.

Из приведенных данных видно, что в наружном ухе у здоровых люден могут встречаться те же плесневые грибы, которые являются возбудителями отомикоза. Выделение этих же видов при отомикозах свидетельствует о потенциальных патогенных свойствах этой сапрофитической грибной флоры.

Необходимо отметить, что при посеве материала, полученного от здоровых людей, мы пи разу не получили роста дрожжеподобных грибов рода Candida, которые доминировали во флоре у наблюдавшихся нами больных отомикозом. Это до некоторой степени доказывает, что в слуховом проходе здорового уха нет необходимых условий для их развития.

Основываясь на данных литературы и результатах собственных микологических исследований, можно прийти к определенным практическим выводам. Частое присутствие единичных элементов гриба на здоровой коже слухового прохода, выделение их при отитах негрибковой природы не дает права ставить диагноз отомикоза только на основании получения культуры гриба без соответствующего подтверждения результатами микроскопического исследования патологического материала.

Диагноз отомикоза должен быть подтвержден результатами микроскопических и культуральных исследований. При этом микроскопическое исследование позволяет подтвердить микотическую этиологию заболевания, а культуральное — определить род и вид гриба-возбудителя.

Поскольку точная видовая идентификация грибов представляет известные трудности, в практической медицине, для того чтобы провести лечение больных, не всегда важно определять вид гриба-возбудителя отомикоза, можно при лабораторных исследованиях ограничиваться их родовой идентификацией.

При отомикозе мы апробировали культуральную методику ускоренного выявления микотического заболевания — «микростикс-кандида», которая рекомендована авторами [Nickerson, Corcorau, 1975] как метод экспресс-диагностики кандндозноп инфекции, в основном вагинального кандидоза. Постановка теста нетрудна. Из транспортировочного мешочка достают ленту с питательной средой, на нее наносят две капли смачивающей жидкости, стерильным ватным тампоном берут отделяемое уха и наносят на тестовую область ленты. При наличии грибов рода Candida здесь образуются коричневые пятна.

При использовании данной методики положительный результат выявляется уже через 24 ч после инкубации, тогда как при обычных микологических исследованиях заболевание можно диагностировать лишь на 6—7-е сутки. Поскольку для проведения правильного лечения очень важно быстро установить диагноз, то мы использовали данную методику. Она была апробирована при диагностировании отомикоза в детском возрасте, поскольку именно у детей особенно важное значение приобретают все методики ускоренного выявления микотического заболевания уха. Это связано с тем, что своевременно недиагностированный отомикоз в детском возрасте может привести к развитию ранней тугоухости, что определяет социальную значимость данной проблемы.


Микологическое исследование

Микологическое исследование было проведено у 38 больных детей с длительными рецидивирующими процессами наружного и среднего уха. Клиническая картина у этой группы детей была подозрительна на отомикоз. Возраст детей от 1 года до 15 лет, мальчиков было 24, девочек — 14.

Из 38 больных положительный результат при исследовании по данной методике был получен у 16, отрицательный— у 22. Поскольку этот тест был новым в диагностике отомикоза, нам было важно сопоставить его с методами, которые обычно применяют при диагностике этой патологии. Сопоставление необходимо и для определения его результативности. В связи с этим у всех больных одновременно проводили микроскопические и культуральные исследования.

При проведении исследования по обычной методике диагноз отомикоза установлен у 18 больных. В эту группу вошли н 16 больных, у которых диагноз отомикоза был установлен также экспресс-методом. Возбудителями заболевания у этих 16 больных были: плесневые грибы рода Aspergillus у 6, рода Penicillium — 4, дрожжеподобные грибы рода Candida — у 4. сочетание двух родов грибов — Aspergi и Candida — у 2. У 2 детей из 18 микотическое поражение уха не было выявлено экспресс-методом. Возбудителями заболевания у этих детей были грибы рода Penicillium и сочетание двух родов грибов — Aspergillus и Candida.

Таким образом, метод экспресс-диагностики «микростикс-кандида», предложенный для диагностики только обусловленных грибами рода Candida поражений, является индикаторным тестом и для выявления плесневого отомикоза. Однако отрицательные результаты исследования у 2 больных отомикозом показывают, что данный тест не всегда может быть использован только как единственный диагностический метод. Данную методику следует использовать для ускоренного выявления микотического заболевания уха в любой возрастной группе.

Апробация нового метода показала целесообразность его применения для диагностики отомикоза у детей. Метод экспресс-диагностики может быть применен не только при кандидозе, но и при плесневом микозе, поскольку положительные результаты были получены и при наличии возбудителей этого заболевания.

При поражениях наружного слухового прохода и барабанной перепонки, обусловленных плесневым грибом рода Aspergillus, в активной стадии процесса, т. е. когда образуется много микотических масс с воздушным мицелием, для диагностики может быть использован операционный оториноларингологический микроскоп. При 10-, 20- и 32-кратном увеличении удается получить объемное изображение элементов грибов рода Aspergillus, особенно отчетливо A. niger.

Можно увидеть тонкие нити-конидиеносцы, на концах которых имеются округлые образования — конидиальные головки. Этот способ назван В. Ю. Солоднловым (1977) отомикроскопическим способом экспресс-диагностики аспергиллезных отомикозов. Практическая значимость предложенного метода очевидна, так как с его помощью можно днагностировать отомикоз уже при первичном осмотре больного, особенно если учитывать все более широкое внедрение в практическую отоларингологию современной увеличительной оптики. Отомикроскоппя в ряде случаев также помогает более точно получить патологический материал для последующих микологических исследований.

При диагностике отомикоза используют иммунологические методы исследования. Самостоятельного диагностического значения эти методы при современном состоянии науки не имеют, но в комплексе с культуральными и микроскопическими методами, которые остаются основными, позволяют уточнить микотический характер заболевания

Для достоверного выявления характера специфических сдвигов необходимо использовать различные иммунологические тесты, направленные на обнаружение антител, различающихся по своим физико-химическим параметрам и биологическим свойствам. С этой целью можно применять реакции агглютинации, непрямой гемагглютинации, преципитации в геле [Оухтерлони, 1949], лейкоцитолиза, связывания комплемента.

По нашим данным, при отомикозе наиболее информативными являются реакции агглютинации и лейкоцитолиза.
Н. Д. Челидзе (1984) прн постановке реакции агглютинации с антигенами грибов родов Aspergillus, Penicillium и Candida положительные результаты получила в 70,5% наблюдений, В. Я. Кунельская (1972)—в 53%. Это свидетельствует об иммунологических сдвигах у больных отомикозом и имеет значение при лечении больных, так как показывает, что микотический сдвиг в ухе не является локальным, а определяет иммунологические сдвиги в организме больного.

Реакция лейкоцитолиза со специфическим грибным аллергеном была положительной у 58% больных с различными формами отомикоза, причем у 41% она была положительной и с аллергенами других грибов [Львова С. В., 1973]. По данным Н. Д. Челидзе (1984), при отомикозе в детском возрасте положительная реакция лейкоцитолиза выявляется у 77% больных, но строго специфическая с аллергеном гриба — возбудителя заболевания — лишь у 29%- По-видимому, это связано с тем, что аллергены из условно-патогенных грибов плохо очищены от общих антигенов различных грибов, а это приводит к появлению большого количества перекрестных реакций при отомикозе, вызванном различными грибами.

Таким образом, реакция лейкоцитолиза позволяет выявить микогенную сенсибилизацию организма. Однако использовать эту реакцию как единственный тест диагностики отомикоза нельзя, поскольку в большом проценте случаев выявляется неспецифпческий результат. В целом на современном уровне знаний иммунологические тесты не могут иметь самостоятельного значения в диагностике отомикоза. Они могут служить только дополнительным методом выявления микотической инфекции и микогенной аллергии.

В.Я. Кунельская
Похожие статьи
показать еще
 
Оториноларингология