Диагностика микотических поражении глотки. Комплексная серологическая диагностика

08 Мая в 8:22 1268 0


По мнению большинства исследователей, при микозах необходимо проводить комплексную серологическую диагностику, основываясь на результатах не менее чем двух реакций, поскольку разные исследования обладают неодинаковой чувствительностью и специфичностью. Кроме того, в крови в процессе развития грибной инфекции вначале появляются преципитины, а затем — агглютинины и комплементсвязывающие вещества. В связи с этим возникает необходимость проводить комплексные динамические обследования больных, включая проведение необходимых серологических реакций в различных модификациях: реакций преципитации, агглютинации, связывания комплемента, иммуноэлектрофореза, иммунофлюоресценции.

При постановке серологических реакций очень важно применять активные антигены различного химического состава — полисахарндные и белковые, а также вакцины. На разных стадиях грибного процесса более чувствительными становятся те или иные реакции.

В микологии активно используют реакцию преципитации. В. М. Лещенко (1970) при диагностике аспергиллеза применял метод преципитации в геле по Оухтерлони в различных модификациях.

Мы при диагностике кандидоза ротоглотки проводили реакции агглютинации, связывания комплемента и преципитации. В реакции агглютинации в качестве антигенов использовали корпускулярные препараты (вакцины), в реакции связывания комплемента в основном полисахаридные препараты, полученные при их бета-нафтоловом экстрагировании из клеток грибов по методу Блинова, в реакции преципитации — только очищенные препараты, не имеющие корпускулярного строения.

Корпускулярные антигены, которые применяли для постановки реакции агглютинации, приготовляли так же, как вакцину из 4—5 очищенных штаммов различных видов грибов одного рода. Все эти грибы выделяли от больных микотическими заболеваниями ротоглотки. Дрожжеподобные грибы рода Candida выращивали на плотных средах (обычно на среде Сабуро). 5—7-дневные культуры гриба смывали изотоническим раствором хлорида натрия. Взвесь делали более равномерной путем длительного встряхивания и фильтрования.

Далее по специальному стандарту устанавливали густоту взвеси 2 млрд грибных клеток в 1 мл. Плесневые грибы выращивали на жидкой среде, автокланировали, затем отмывали от среды н растирали с кварцевым песком. Полученную взвесь фильтровали, для того чтобы удалить из нее грубые частицы и хлопья, и разводили до концентрации 2 млрд/мл грибных клеток.

Реакцию агглютинации ставили по общепринятой методике. Этот метод диагностики мы применили у 50 больных кандидозом миндалин и у 100 больных хроническим тонзиллитом бактериально-микотической этнологии. При кандидозс миндалин она была положительной у 48, причем у 38 больных (70%) при высоких разведениях сывороток— 1 : 160 и выше. Положительная реакция агглютинации при низких титрах разведения сыворотки — 1 : 20, 1 : 40— может отмечаться и у здоровых людей.

Из 100 больных хроническим тонзиллитом при бактериально-микотическом инфицировании реакция агглютинации была положительной у 93, но при высоких разведениях сыворотки—только у 28 (28%). Эта реакция была наиболее выраженной при активном микотическом процессе.

При постановке реакции связывания комплемента с использованием полисахаридных антигенов В. Г Колонии (1974) выявил резко положительные результаты реакции в разведении 1 : 80 у больных хроническим гранулематозным кандидозом.

Нами при постановке реакции связывания комплемента 40 больным кандидозом миндалин положительные результаты были выявлены у 27 человек.

Одним из важных методов серодиагностики различных заболеваний является реакция преципитации. Реакция преципитации осуществляется при взаимодействии только двух компонентов: иммунной сыворотки и антигена.

Разведение антигенов производят изотоническим раствором хлорида натрия. При постановке этой реакции чаще используется метод встречной диффузии в агаровом геле (реакция Оухтерлони). Этот метод с небольшими изменениями мы применяли у больных кандидозом глотки. Нами использовался 2% водный агар, содержащий 1% хлорида натрия и 0,5% фенола. Его растапливали и разливали тонким слоем в чашки Петри.

Специальной формой в остывшем агаре делали шесть лунок. В одну из них вносили каплю антигена, в остальные—испытуемую сыворотку в различных разведениях. В положительных случаях образуются отчетливо видимые линии, когда антиген   и   антитело диффундируют друг к другу и на месте встречи образуются линии преципитации. При отрицательных результатах агар оста ется прозрачным.

Серологические исследования методом преципитации в геле

Нами проведены серологические исследования методом преципитации в геле с антигенами грибов родов Candida, Aspergillus, Penicillium 75 больным с микозами ротоглотки.

Возбудителями заболевания у 70 больных были дрожжеподобные грибы рода Candida, у 2 плесневые грибы рода Aspergillus и у 3— рода Penicillium. Результаты реакций представлены в табл. 7.



Таблица 7. Результаты реакции преципитации у больных с микотическими поражениями ротоглотки
Результаты реакции преципитации у больных с микотическими поражениями ротоглотки

Как видно из данных, приведенных в табл. 7, реакция преципитации является в достаточной мере специфичной при микозе ротоглотки: она была положительной у 50 (66% ) из 75 больных.

В проведенных исследованиях были установлены и положительные перекрестные реакции преципитации с неспецифнческим антигеном. Так, перекрестные положидельные реакции с антигеном грибов рода Candida без выявленного кандидоза были зарегистрированы у 4 больных. Положительные неспецифические реакции с антигеном грибов рода Aspergillus отмечены у 4 и с антигеном грибов рода Penicillium — у 7 больных. Как правило, положительными были неспецифические реакции с цельной сывороткой или в слабых разведениях, т. е. в низких титрах.

Приведенные данные достаточно убедительно показывают ценность реакции преципитации в агаровом геле, в связи с чем ее можно рекомендовать как один из серологических тестов для подтверждения микотической этиологии заболеваний ротоглотки.

Получение положительных результатов в реакции с неспецифическим антигеном может быть отчасти расценено как перекрестная реакция с близкими антигенными субстанциями; мы также допускаем, что в этих случаях могло иметь место миконосительство. Для подтверждения этого положения по аналогичной методике поставили реакцию преципитации в контрольной группе, состоящей из 20 человек, не страдавших микозом. Положительная реакция преципитации с антигеном грибов рода Candida отмечены у 2 человек (с цельной сывороткой и в разведении 1 :10) и с антигеном грибов рода Penicillimn у 1 человека (с неразведенной сывороткой).

Приведенные выше данные свидетельствуют о безусловной ценности серологических исследований при грибковых заболеваниях ротоглотки. При серологической диагностике необходимо использовать несколько реакций.
В целом же. основываясь на результатах проведенных нами исследований, можно сделать заключение, что при выявлении микозов ротоглотки серологические реакции не могут служить единственным диагностическим критерием.

Они приобретают решающее значение только в комплексе с другими клинико-лабораторными тестами. Обнаружение в сыворотке крови больных соответствующих антител не только позволяет подтвердить диагноз микотического заболевания, но и является показателем реактивно-иммунологической способности организма. В настоящее время известны многочисленные закономерности зависимости иммунологической реактивности организма от состояния его общей реактивности.

Необходимо максимально полно использовать многие указанные выше иммунологические тесты, сопоставляя их с результатами микроскопического и культуральных исследований, а также клинической картиной заболевания

Гистологические методы диагностики микозов ротоглотки применяют ограниченно, поскольку их можно диагностировать с помощью других исследований и нежелательно производить биопсию, а терапия микозов ротоглотки в основном консервативная. Однако гистологические исследования приобретают важное значение при трудно  диагностируемых   заболеваниях, полиморфной клинической картине, тяжелых инфильтративно-язвенных поражениях.

Если при наличии характерных проявлений заболевания (например, при кандидозе слизистой оболочки ротоглотки) для уточнения диагноза достаточно обнаружить элементы грибов в патологическом материале и выделить возбудителя при культуральных исследованиях, то в других случаях для диагностики микоза необходимо применить гистологические методы исследования. Гистологические исследования проводят и в тех случаях, когда грибы не удается культивировать на искусственных средах.

Целенаправленное гистологическое исследование микоза во многих случаях осуществляют для уточнения предполагаемого диагноза, установленного на основании лабораторных данных. Микологическое исследование может служить дополнением к гистологическому. Вообще гистологическая и культуральная диагностика дополняют друг друга, и успешное выявление микотического поражения во многом осуществляется совместными усилиями гистологов и микологов.

В ряде случаев гистологическая диагностика микозов ротоглотки необходима и при установлении миконосительства. Обнаружение элементов гриба в тканях без тканевой реакции не дает права диагностировать микотическое поражение. Лишь при сочетании тканевой реакции с выявлением элементов гриба можно установить диагноз микотического поражения.

В.Я. Кунельская
Похожие статьи
показать еще
 
Оториноларингология