Диагностика микотических поражении глотки. Количественный подсчет колоний грибов

08 Мая в 8:20 1094 0


Количественный подсчет колоний грибов рода Candida мы производим следующим образом. Налет с миндалин берут стерильным тампоном и помещают его в пробирку с 5 мл жидкой среды Сабуро. Условно считают, что на тампоне 0,1 мл патологического секрета. В последующем из пробирки забирают 0,1 мл среды и производят пересев на чашку Петри с твердой средой Сабуро, после чего подсчитывают количество выросших колоний. Для установления истинного количества колоний грибов рода Candida в I мл патологического секрета следует количество колоний умножить на 50.

При кандидозной ангине при посевах налетов, как правило, выявляется сплошной рост Candida — 30— 45 тыс. колоний в 1 мл. Это важный тест при определении активности микотического процесса (рис. 29). При обследовании наблюдавшихся нами больных хроническим тонзиллитом у 68% выявлен рост грибов в количестве 30 тыс. колоний в 1 мл, у 30% —от 5 до 7,5 тыс. и у 2% от 200 до 300 колоний в 1 мл. Выявление при посевах налетов с миндалин грибов рода Candida в количестве до 100 колонии в 1 мл мы не расценивали как диагностический признак микотического поражения миндалин. В основном в 98% случаев высевали со слизистой оболочки миндалин свыше 5000 клеток грибов в 1 мл.

Сплошной рост культуры гриба рода Candida при кандидозной ангине при первичном посеве на среду Сабуро.
Рис. 29. Сплошной рост культуры гриба рода Candida при кандидозной ангине при первичном посеве на среду Сабуро.

Таким образом, основным тестом диагностики кандидоза ротоглотки является наличие возбудителя во всех препаратах в большом количестве и активном состоянии в сочетании с типичной клинической картиной.

Культуральные исследования следует использовать и как критерий при определении эффективности антимикотической терапии, Иx целесообразно проводить через 10 дней, 1—3 мес и один раз в год после лечения. При положительных результатах лечения рост гриба в посевах должен отсутствовать или быть единичным ( то 100 клеток в I мл). При клинически положительных результатах лечения рост гриба в количестве от 5 до 7,5 тыс колоний в 1 мл должен быть расценен как прогностически неблагоприятный тест. В этом случае больные должны оставаться под диспансерным наблюдением и им следует проводить антимикотическую терапию.

Морфологическое изучение возбудителен позволяет лишь получить родовую характеристику дрожжеподобных грибов. Видовую идентификацию производят на основании исследований биохимической активности грибов но характеру сбраживания Сахаров и ассимиляции их на синтетических средах (описание методики представлено в главе «Отомикоз»).

Наиболее часто встречающегося возбудителя кандидоза ротоглотки — С. albicans определяют по образованию ростковых трубок в сыворотке крови человека или кролика через 24 ч в термостате при температуре 37°С (рис. 30). Морфологически для С. albicans характерно образование круглых двухконтурных хламидоспор.

Ростковые трубки, характерные для Candida albicans. 100.
Рис. 30. Ростковые трубки, характерные для Candida albicans. 100.

В отличие от отомикоза важными методами диагностики фарингомикоза являются аллергологические и серологические исследования. Они позволяют не только уточнить диагноз заболевания, но и определить степень выраженности ответной реакции организма на грибную инфекцию, что имеет важное значение при установлении патогенеза и выбора метода терапии данного микоза, особенно кандидозной ангины.

Для выявления аллергологическон перестройки организма ставят реакцию лейкоцитоза, с помощью которой определяют повышенную чувствительность лейкоцитов крови больных к специфическим аллергенам гриба рода Candida. У больных кандидозом миндалин процент деформации лейкоцитов составляет от 12 до 27.

Мы также проводили изучение этой реакции. При постановке реакции лейкоцитоза с аллергеном гриба рода Candida 62 больным тонзиллитом, осложнившимся кандидозом (возраст 17—70 лет, длительность заболевания 1 8 мес), она оказалась положительной у 47 (76%) больных.

Для выявления специфической микогенной сенсибилизации применяют также внутрикожные пробы с грибными аллергенами. При постановке внутрикожных проб с аллергеном гриба рода Candida у 62 больных тонзиллитом, осложнившимся кандидаинфекций, они оказались положительными у 53 (84%) больных. При этом кожно-алергическая реакция у большинства из них была положительной и резко положительной. У значительного числа больных (68%) кожная реакция протекала по типу гиперчувствительности немедленного типа и у 32% по типу гиперчувствительности замедленного типа. Выявлена корреляционная зависимость между интенсивностью внутрикожных проб и показателями лейкоцитолиза.



Из методов серологических исследований в диагностике кандидоза ротоглотки чаше используют реакции связывания комплемента, агглютинации и иммуно-флюоресценции. Реакцию агглютинации ставят по обычной микробиологической методике. Положительную реакцию констатируют в разведениях сыворотки выше 1 : 80. У больных кандидозом миндалин она бывает положительной в разведении 1 : 160, 1 :320, 1 : 640.

Ряд исследователей [Беднова В. И. и др., 1975; Степанова Ж. В. и др., 1978] установили, что реакция иммунофлюоресценции весьма чувствительна при кандидозной инфекции. При положительной реакции под люминесцентным микроскопом видно свечение периферического ободка спор или мицелия гриба рода Candida Свечение ободка бывает разной интенсивности, что определяет степень выраженности положительной реакции
М. М. Руденко (1973) использовал реакцию иммунофлюоресценции при диагностике кандидоза полости рта у 84 больных. Он считает, что этот тест позволяет выявлять заболевание на его ранней стадии.

Мы применяли реакцию иммунофлюоресценции при диагностике кандидозной ангины у больных хроническим тонзиллитом при бактериально-микотическом инфицировании. Был использован непрямой метод реакции иммунофлюоресценции. В качестве антигена применяли смесь нз пяти вирулентных штаммов дрожжеподобного гриба С. albicans, выделенных от больных кандидозной ангиной. Антиген готовили по следующей методике.

Брали двухсуточную культуру грибов, приготовляли густую взвесь на изотопическом растворе хлорида натрия, которую дважды промывали и центрифугировали. Осадок обрабатывали 10% раствором формалина и вновь промывали изотоническим раствором хлорида натрия. Затем разводили из расчета, чтобы в темном поле зрения микроскопа было не более 15 клеток Candida. Люминесцирующую сыворотку против глобулинов человека предварительно титруем на сыворотке крови больных хроническим гранулематозным кандидозом и лиц, вошедших в контрольную группу.

При постановке данной реакции мы применяли неинактивированную сыворотку и разведении 1 : 80 (РИФ 80). Для окраски использовали синий Эванса, разведенный в изотоническом растворе хлорида натрия в 20 000 раз. Результаты реакции иммунофлюоресценции оценивали по степени свечения образующегося вокруг клетки или мицелия гриба светящегося зеленого ободка. При ярко-зеленом свечении оценивали реакцию ++++ при   менее ярком -+++, при слабом свечении ---+ Отрицательную реакцию регистрировали при отсутствии свечения.

При постановке данной реакции у 50 больных кандидозом миндалин она оказалась положительной у 43: У 9 + + + +. У 12 + + +, у 15 + +, у 7 +. У 7 больных реакция была отрицательной.

Важно отметить, что реакция иммунофлюоресценции у здоровых людей крайне редко бывает положительной [Степанова Ж. В., Беднова В. П., 1978], поэтому положительные результаты реакции иммунофлюоресценции при кандидозе миндалин имеют большую диагностическую ценность.

При изучении данной реакции у 100 больных хроническим тонзиллитом при бактериально-микотическом инфицировании она была положительной у 52: у 4 + + + + , у 12 + + +, у 18 + +, у 18 +.

Таким образом, реакция иммунофлюоресценции более выражена при кандидозе миндалин, чем при хроническом тонзиллите с грибным инфицированием. Однако в целом положительные результаты этой реакции у половины больных с данной патологией свидетельствуют о значимости грибного инфицирования миндалин, которое вызывает иммунологическую перестройку в организме.

При серологической диагностике микотических заболеваний также с успехом используют реакции аглютинации, связывания комплемента, преципитации, иммуно-электрофореза. Поскольку дрожжеподобные грибы рода Candida являются полноценными антигенами, то при кандидозной инфекции целесообразно применять серологические методы исследования. Большую результативность показала реакция агглютинации с антигенами гриба рода Candida у больных кандидозом [Глуховцев Б В 1950; Колошин В. Г., 1974, и др.].

Реакция связывания комплемента, так же как и реакция агглютинации, отличается достаточной чувствительностью и специфичностью при генерализованных и висцеральных формах микотически.х заболеваний [Колошин В. Г., 1975; Степанова Ж. В. и др., 1976].

Диагностическая ценность этих реакций при кандидозе, по данным разных авторов, далеко неодинакова. Так, И. А. Хатридзе (1974) считал, что реакция агглютинации более чувствительна, чем реакция связывания комплемента. Н. П. Блинов (1964) отмечал более высокую специфичность реакции связывания комплемента, которая была положительной у 92% обследованных им больных микозом. П. П. Кашкин и В. В. Лисин (1983) считали, что реакция связывания комплемента по специфичности превосходит реакцию агглютинации, но уступает ей в чувствительности

В.Я. Кунельская
Похожие статьи
показать еще
 
Оториноларингология