Роль грибковой инфекции в патологии человека. Микологические методы окраски

02 Мая в 5:41 728 0


Микологические методы окраски

Микроскопий окрашенный препаратов — чаще необходимо при изучении отделяемого язв, свищей, соскобов грануляций, реже — иного материала от больных дерматомикозами для получения большей контрастности элементов гриба ( В.М.Лещенко, 1977).

В литературе описано большое количество специальных микологических методов окраски, в т. ч., использующихся в настоящее время ограниченно— по Граму, Граму-Вельшу, Цилю-Нильсену, Романовскому-Гимза, Райту (сохранила значение для обнаружения криптококкков, Histoplasma capsulatum в крови и костном мозге), Аравийскому (с гематеином Майера и эозином, что важно для выявления сферул кокцидиоидоза), лактофенолом, лактофуксином и мн. др.

Культуральное исследование (посев) должно по возможности дополнять микроскопическую диагностику. Является по сути посевом патологического материала на питательную среду с выделением культуры гриба, макро— и микроскопическим ее изучением, получением чистой культуры и последующей идентификацией гриба. Материал засевают в 4-5 пробирок.

Грибы выращиваются при комнатной температуре. Последующее макроскопическое и микроскопическое изучение культуры производится через 10-12 дней. Источниками углеводов в средах являются глюкоза, мальтоза (реже — мед, злаковые и др.), азотистых соединений — белки человека и животных, аминокислоты, пептоны и др.; добавляются также органические кислоты, минеральные вещества (К, Са, Na, Mg, Fe, S, Р и др.).

Большое разнообразие сред определяется включением в них ингредиентов естественного и искусственного происхождения, органических и минеральных веществ — при наличии (в плотных средах) гелеобразующих субстанций (агар-агар, желатин и др.) или отсутствии таковых (в жидких средах или бульонах). Наиболее простой и распространенной является среда Сабуро, в составе которой (в различных модификациях): мальтозы (глюкозы) — 4%, пептона— 1-3%, агарагара (имеется в плотных, но не жидких средах) — 2%, воды — до 100%.

Следует учитывать, что среда Сабуро не является селективной, и на ней могут расти иные микроорганизмы, содержащиеся в патологическом материале. Для торможения «побочного» роста их в среду добавляют антибиотики (хлорамфеникол или левомицетин, гентамицин, стрептомицин, тетрациклин, пенициллин); кроме того, для подавления возможного роста грибов-сапрофитов в среду включают циклогексимид (актидион).

В принципе, вариабельность состава сред для выявления тех или иных видов грибов может быть значительной. Так, при идентификации дерматофитов применяют среду Сабуро с циклогекcимидом, хлорамфениколом, гентамицином и дрожжевым экстрактом; для выделения дерматофитов и диморфных грибов из загрязненного посторонней флорой материала может быть использована среда с хлорамфениколом и циклогексимидом и т. д.

Помимо «классической» среды Сабуро распространены среды типа ДТМ (dermatophytes test medium — с дрожжевой вытяжкой, циклогексимидом, гентамицином, хлортетрациклином), СМВ (чаще применяют при подозрении на глубокие микозы или для получения гемокультуры).

Режим культивирования и принципы микробиологической идентификации возбудителей оцениваются квалифицированными лаборантами-микологами с проведением микроскопического (с изучением морфологии грибов) исследования.

С клинико-микробиологической точки зрения питательные среды условно подразделяют на: 1) для культивирования дерматофитов (Сабуро, сусло-агар, сусло жидкое и др.); 2) для дрожжеподобных грибов рода кандида (среды Сабуро, Городковой, Блинова и др.); 3) для выращивания плесневых грибов (агар Чапека с глюкозой или крахмалом, жидкая среда Чапека, применяемая при изготовлении антигенов), 4) дифференциальные среды (Френсиса, Городковой, Паллаччи, кукурузный агар, для ассимилляции, диссимиляции, ферментации углеводов, для ассимиляции источников азота и др.); 5) для выращивания актиномицетов (среда на основе мясопептонного агара); 6) для возбудителей гистоплазмоза и кокцидиоидоза (аспарагиновая синтетическая среда, среды Конверса, Ролланда).

Диагностические доказательства при глубоких микозах отличаются от обычных лабораторных исследований при дерматомикозах. Распознавание тканевой формы гриба (своеобразной для каждого глубокого микоза и ничем не напоминающей дерматофиты в патологическом материале) остается ведущим при подозрении на глубокий микоз.

Получение же культуры возбудителя возможно только в специальных клинико-лабораторных центрах. Это следует особо учитывать — культуры возбудителей, выделенных от больных (в отличие от тканевых форм гриба) обладают высокой контагиозностью. К сожалению, известны трагические случаи заражения работников лабораторий, занимавшихся культивированием возбудителей глубоких микозов.



Сохраняют свое значение гистопатологические и гистохимические методы диагностики. Находят применение они го. при глубоких микозах с целью выявления в тканях (биоптаты, аутопсийный материал) элементов гриба, а также регистрации различных типов тканевых реакций, инициируемых грибами (воспаление и Др.).

Взятый биоптат заливают 10% раствором формалина на 24-48ч, после чего заливают в парафин (или целлоидин) или замораживают с последующим приготовлением срезов. Гистопатологически грибы можно обнаружить при окраске гематоксилин-эозином, по Грокотту и Гомори, ШИК (PAS) окраски, рекомендуемой при обнаружения грибов в срезах ткани ввиду окрашивания полисахаридов клеточной стенки гриба, гликогена и нейтральных муцинов.

Тканевые реакции

Тканевые реакции, вызываемые грибами — по-существу, охватывают самые различные формы тканевого ответа, и могут наблюдаться при различных процессах, в т.ч. бактериальных инфекциях.

При характеристике тканевых реакций в ответ на внедрение грибковых микроорганизмов в порядке общего перечисления следует указать:
1) острый тип воспаления без специфически обозначенных черт;
2) тип хронического воспаления, также лишенный специфических особенностей;
3) пиогенный тип реакции, отмечаемый в той или другой степени при остром и хроническом воспалении (неспецифического типа);

4) гранулематозные типы хронического воспалительного характера, включающие в себя несколько более или менее очерченных вариантов микотической гранулемы: а)гранулема с казеозными изменениями; б)фиброказеозная грануломатозная (легочная) реакция (хронического типа); в) «саркоидный» тип грануломатозной эпителиоидно-клеточной реакции без исхода в казеоз; г) склеро-зирующаяся гранулема с чертами сходства с гранулемами инородных тел; д) реакция тканевого смешанного пиогенного и гра-нуломатозного типа; е)гистоцитомикотическая гранулема (свойственная гистоплазмозам);
5) псевдоэпителиоматозная гиперплазия при хронических язвенных процессах, вызываемых некоторыми возбудителями грибковых заболеваний;
6) тромботический артериит микотической природы;

7) кальцификации тканей в очагах грибкового поражения;
8) аллергические реакции в тканях острого и хронического характера (микиды);
9) изменения токсического и токсико-аллергического характера в тканях (локального и общего типа);
10) тканевые реакции в ответ на внедрение патогенных грибов, имеющие черты сходства с гранулемами вирусной этиологии.

Острая неспецифическая реакция на внедрение грибковых элементов наблюдается чаще всего и наиболее выражена при трихофи-тиях, вызываемых дерматофитами — возбудителями трихофитии животных (в форме кериона или паразитарного сикоза); исходом этих реакций бывает острое гнойное расплавление тканей (соединительнотканная основа собственно кожи, жировая клетчатка, придатки кожи — сальные и иногда потовые железы).

Развитие реакций подобного типа происходит обычно в области волосяного фолликула, - т.е. начинается как фолликулит или перифолликулит. Сгруппированные очаги воспалительного характера приводят к формированию абсцесса с обширным расплавлением тканей.

В гное находятся многочисленные лейкоциты в стадии распада и тканевой детрит. Одним из вариантов подобного (керионподобного) воспаления являются фурункулоподобные элементы, отмечаемые при ряде микотических инфекций (кандида; бластомицеты, возбудители североамериканского бластомикоза; иногда — нокардия и споротрихоны).

Хронический тип воспаления тканей наиболее выдержан, например, при риноспоридиозе; вокруг сферулоподобных клеток гриба формируется воспалительный инфильтрат - в составе лимфоцитов, плазматических клеток, нейтрофилов и фибробластов; гигантские клетки встречаются вокруг пустых спорангий гриба или в самих оболочках клеток гриба.

Пиогенный тип реакции тканей наблюдается при остром и хроническом воспалении, обусловленном различными возбудителями микозов.

Кулага В.В., Романенко И.М., Афонин С.Л., Кулага С.М.
Похожие статьи
показать еще
 
Аллергология и иммунология