Роль грибковой инфекции в патологии человека. Иммунологические и молекулярные методы диагностики

02 Мая в 5:44 579 0


Иммунологические и молекулярные методы

Иммунологические и молекулярные методы: в настоящее время приобрели весьма важное значение, особенно при подозрении на атипичные формы болезней, глубокие, диссеминированные микозы. Эти способы не связаны с выделением возбудителя, как правило регистрируют либо степень иммунного ответа (определение специфических антител и антигенов), а также праймеров ДНК соответствующего возбудителя.

Следует отметить, что основным «материалом» для иммунологической диагностики является кровь, ввиду сранительной трудности выделения возбудителя непосредственно из нее и из глубоких очагов поражения ранее существующими методами.

Смысл иммунологической диагностики заключается в определении вида и титра специфических антител в крови (реже — в иных биологических жидкостях) — серологический вариант исследований, в котором чаще регистрируются lgG-преципитины, что может отражать факт носительства микоза (например, кандидоза), а также ранее перенесенной инфекции.

Перечисленное является существенным недостатком серодиагностики ввиду отсутствия антигена (например, у С. albicans), который экспрессировался бы независимо от фазы и роста гриба, окружающей среды и свидетельствовал об инфекции, в т.ч., находящейся в активной фазе (J. Р. Martinez и соавт., 1998).

Считается целесообразным определять уровень различных классов антител при постановке ряда методик (РСК, реакция преципитации, реакция иммунодиффузии по Манчини, иммуноэлектрофорез, иммуноферментный анализ и др.). Определенное значение в диагностике аллерго-ассоциированных вариантов микозов (в т.ч. кандидоза) может иметь радиоаллергосорбентный (RAST) тест, регистрирующий IgE; может быть полезным при хронической инфекции кожи и слизистых оболочек, поражении легких и др.

С другой стороны, серологические методы диагностики имеют тенденцию к развитию и усовершенствованию; так, разрабатываются и апробируются реакции, в которых используются иммунодоминантные белки теплового шока (hsp47), антигены проростковых трубок, протеиназы, енолазы, маннопротеиды и др. (J. P. Garsia-Ruis и соавт., 1997).

Альтернативой серологическим методам исследования является регистрация антигенов грибов в крови; наиболее распространенные наборы разработаны и апробированы для многих возбудителей-грибов рода Candida, аспергилл, криптококков, диморфных грибов.

Наиболее широко распространен метод латекс-агглютинации, регистрирующий различные антигены, например термостабильный маннановый или протеиновый у С. albicans. Ввиду вариабельной чувствительности рекомендуется повторная постановка реакции. Более современными и чувствительными являются иммуно-ферментный и радииммунный анализ, но они более дорогостоящи и сложны в постановке.


Молекулярные методы идентификации патогенных грибов

Молекулярные методы идентификации патогенных грибов: среди них наиболее распространены — полимеразная цепная реакция (ПЦР) и (реже) - газожидкостная хроматография; испытывается также лигазная цепная реакция (ЛЦР).
ПЦР в настояще время наиболее апробирована при кандидозе различных локализаций; в качестве исследуемого материала берут кровь; возможно использование мочи, слюны.

С другой стороны, имеется значительное число диагностических «недооценок и переоценок» результатов ПЦР, особенно при взятии материала из т.н. «нестерильных локализаций» - слюны, мочи. Ряд авторов считают, что ПЦР наиболее обоснована в комплексной диагностике глубоких и висцеральных форм микозов (в частности, кандидоза) и диссеминированной микотической инфекции; метод нуждается в дальнейшей «оттитровке».

Газожидкостная хроматография по сути регистрирует некоторые компоненты клеточной стенки грибов (например, кандида) за счет определения т.н. правовращающих изомеров маннозы и арабинитола; материалом для исследования служит кровь. Своеобразным противопоказанием к постановке метода является ХПН и иные состояния, сопровождающиеся задержкой указанных метаболитов и недостаточной их элиминацией; расчет их концентрации ведется по содержанию креатинина.

Таким образом, микологическое исследование включает микроскопию патологического материала, выделение возбудителя в культуре — с изучением характера роста на питательных средах, биохимических свойств (например, при идентификации дрожжеподобного гриба Кандида альбиканс - тип филаментации, хламидообразование, особенности ферментации). Выявление гриба (и его элементов) в ткани остается одним из основных и доступных методов диагностики микозов (особенно глубоких).

Наряду с классическими микологическими исследованиями используют современные серологические и иммунологические методы (РСК, иммунодиффузии, иммуноэлекрофореза, иммуноферментный анализ), хромографию и др. (к сожалению, некоторые из методов остаются недоступными в повседневной практике врача).

Кулага В.В., Романенко И.М., Афонин С.Л., Кулага С.М.
Похожие статьи
показать еще
 
Аллергология и иммунология