Экспериментальное воспроизведение аллергических васкулитов

22 Мая в 8:51 459 0


Воспроизвести в эксперименте картину поражения кровеносных сосудов можно различными способами; с другой стороны, некоторые формы васкулитов, наблюдаемые в клинической практике, не всегда удается получить у подопытных животных.

Так, например сложно вызвать искусственно симптомокомплекс узелкового периартериита. В отличие от человека, как замечает В.А. Вальдман, животные почти никогда не болеют этими заболеваниями и другими, «как бы человеческими» сосудистыми расстройствами. Для воспроизведения аллергических васкулитов в эксперименте в качестве сенсибилизирующего агента чаще используются белковые продукты, бактериальные, лекарственные препараты — нормальная лошадиная сыворотка, полистафилококковый, яичнобелковый или туберкулиновый антиген и др.

Развитие процесса происходит по типу одного из классических феноменов — Сахарова-Артюса, Санарелли, Шварцмана. Кровеносные сосуды в этих случаях играют роль «шокового органа». Картина аллергического васкулита лучше воспроизводится у кроликов, менее отчетливо — у морских свинок, плохо — у крыс и белых мышей.

Для обоснования гипотезы микогенного генеза аллергических васкулитов мы прибегли к экспериментам на кроликах, целью которых было изучение влияния некоторых патогенных грибов (кандида альбиканс, гипсовый трихофитон и интердигитальный трихофитон Кауфман-Вольф) на кровеносные сосуды этих животных (всего использовано 97 кроликов в нескольких сериях экспериментов).

Методика приготовления аллергенов и условия сенсибилизации животных: из 2-суточных культур дрожжеподобных грибов кандида альбиканс, 12-14-суточных культур гипсового трихофитона и межпальцевого трихофитона (гипсовидный вариант эпидермофитона Кауфман-Вольф) готовили взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия (смыв и растирание грибов в ступке проводили в стерильных условиях). Взвесь микроорганизмов убивали прогреванием на водяной бане при температуре 80°С в течение 2 часов, после чего проводили контрольные засевы на стерильность.

Густота взвеси определялась в камере Горяева (по методике подсчета лейкоцитов) и соответствовала количеству клеток в 1мм3 жидкости — для кандида 18500-18700, для трихофитона Кауфман-Вольф — 25900-30000, гипсовидного трихофитона — 33800-34000. Кроме вакцины, в качестве сенсибилизирующего материала использованы антигенные фракции (из микологической лаборатории проф. П.Н. Кашкина). Наиболее подходящими для этого оказались полисахаридные антигены из культур кандида альбиканс и гипсового трихофитона (1:1000).

Наиболее демонстративными и статистически достоверными оказались опыты, проведенные по разработанной нами следующей методике:

Кролики вначале сенсибилизировались патогенными грибами. С этой целью им в область правого бока внутрикожно и подкожно вводились взвеси убитых культур по 5 мл с промежутками в 5-6 дней, всего 8-9 раз. Через 6-8 дней после последней сенсибилизирующей иньекции антигена подопытным и контрольным (не подвергались сенсибилизации) животным перевязывали центральную артерию уха с двух сторон. В изолированный отрезок сосуда (протяженностью 2,5-3 см) вводили разрешающую дозу антигена — из того же гриба, с помощью которого проводили сенсибилизацию, в количестве 0,1 мл.

Через 48 часов иссекали часть уха с захватом центральной артерии. Биопсированная ткань фиксировалась в 12% растворе нейтрального формалина, обезвоживалась в спиртах восходящей крепости (60, 70,80, 96, 96%) с последующей заливкой в парафин. Срезы ткани толщиной 6-8 микрон окрашивали гематоксилин-эозином и по Ван-Гизону. Исследовано более 1200 гистологических препаратов,(гистолог-консультант — доц. М.Ф.Карпова).

Результаты исследований

В процессе сенсибилизации установлено, что после первых внутри-кожных и подкожных иньекции заметной реакции на введение антигена не наблюдалось. Начиная с 3-го введения в месте иньекции возникали воспалительные инфильтраты, размеры которых увеличивались с каждой последующей иньекцией и доходили до величины грецкого ореха. Начиная с 4-го введения, кожа над инфильтратом становилась резко гиперемированной. После 6-й иньекции у части животных наблюдался очаговый некроз кожи с образованием черной геморрагической корки. Таким образом, посредством культур патогенных грибов оказалось возможным воспроизвести картину аллергической реакции типа феномена Артюса.

При изучении серийных гистологических препаратов у кроликов подопытной группы (после предварительной сенсибилизации взвесью кандида альбиканс и последующего введения разрешающей дозы этого же антигена) обнаружены значительные изменения центральной артерии уха аллергического типа. Выявлены набухание, участки деструкции, пролиферации эндотелия, в некоторых срезах — некроз стенки артерии и тромбообразование. В воспалительных очагах формировались выраженные клеточные инфильтраты (особенно вокруг участков некроза стенки артерии), состоящие из нейтрофилов, эозинофилов, лимфоидных клеток и гистиоцитов.

Местами отмечались участки клеточного распада. Указанные изменения носили очаговый характер; часто некроз развивался в сосуде лишь в каком-либо одном сегменте. Наряду с резко обозначенными изменениями сосудов, на некоторых срезах артерия выглядела малоизмененной. В некоторых препаратах отмечено тромбообразование. В ткани, окружающей центральную артерию уха, определялись отек, кровоизлияния, очаги фибриноидного некроза, воспалительные инфильтраты, состоящие из нейтрофилов, эозинофилов, лимфоидных клеток и гистиоцитов. Значительные изменения отмечены также в венах, артериолах и капиллярах, находящихся вблизи центральной артерии.

В венозных сосудах — явления тромбофлебита: местами вены терялись в густом клеточном инфильтрате. В артериолах — деструкция стенок, фибриноидный некроз, очаговые и диффузные инфильтраты. В капиллярах — очаги пролиферации и деструкции эндотелия, разрыхление стенки, явления тромбоза. Хотя разрешающая доза антигена вводилась в центральную артерию, антиген попадал, по-видимому, в мелкие сосуды по коллатералям.

У кроликов контрольной группы (не подвергавшихся предварительной сенсибилизации) после однократного введения в центральную артерию уха антигена (взвеси убитой культуры кандида альбиканс) значительных изменений в сосудах обычно не наступало. В некоторых срезах ткани уха можно было отметить небольшую отечность и набухание эндотелия центральной артерии, а также некоторые изменения в окружающей ткани — отек, незначительные клеточные инфильтраты.



Как видно из результатов исследований, используя культуру дрожжеподобного гриба кандида альбиканс, удавалось вызвать изменения кровеносных сосудов аллергического типа — т.е. воспроизвести в эксперименте картину аллергического микотического васкулита. Особенно резкие изменения развивались в капиллярах, артериолах и венулах, т.е. мелкие сосуды были, по-видимому особенно подвержены действию гриба (элементы гриба в срезах ткани в пределах очагов поражения не обнаруживались).

При этом развитие аллергического васкулита возникало лишь в условиях предварительной сенсибилизации и последующего введения разрешающей дозы соответствующего антигена. Однократного поступления антигена в кровеносный сосуд было недостаточно для развития сосудистого процесса.

Сходные изменения выявлены в сосудах уха и окружающей их ткани при использовании антигена из культуры гипсового трихофитона.

При введении культур межпальцевого трихофитона (эпидермофитона Кауфман-Вольф) развивались менее значительные изменения в кровеносных сосудах, чем при сенсибилизации взвесями культур кандида альбиканс и гипсового трихофитона. В опытах с гипсовидным вариантом межпальцевого трихофитона Кауфман-Вольф отмечалась заметная приуроченность воспалительных изменений к венам (явления флебита и выраженного тромбофлебита) и капиллярам (капиллярит). В центральной артерии наблюдалась картина эндартериита.

При сенсибилизации животных отдельными фракциями грибов (полисахаридным антигеном кандида альбиканс и гипсового трихофитона) можно было вызвать развитие очаговых аллергических изменений в кровеносных сосудах даже при использовании небольших доз и больших разведений антигенов. В центральной артерии эндотелий был в состоянии набухания, появлялись участки деструкции, пролиферации и гиперхромии.

В ряде срезов ткани был виден некроз стенки центральной артерии с умеренной инфильтрацией нейтрофильными лейкоцитами, реже — эозинофилами и выраженным клеточным распадом. В некоторых срезах было видно образование пристеночных тромбов. В периааскулярной ткани отмечены очаговые и диффузные инфильтраты, состоящие преимущественно из сегментоядерных лейкоцитов, отек ткани, набухание волокон, участки кровоизлияния.

Т.о., эксперименты, проведенные на кроликах, показали возможность воспроизведения аллергических васкулитов микотической природы при использовании в качестве сенсибилизирующей субстанции патогенных грибов: кандида альбиканс, гипсового трихофитона и межпальцевого трихофитона Кауфман-Вольф (гипсовидный вариант). Аллергические изменения в кровеносных сосудах развивались только в условиях предварительной сенсибилизации указанными грибами.

Отдельные фракции грибов (полисахаридные антигены кандида альбиканс и гипсового трихофитона), используемые для сенсибилизации даже в больших разведениях и небольших дозах, также вызывали аллергические изменения в кровеносных сосудах у подопытных животных.

Созданная нами экспериментальная модель микотических васкулитов подтверждает положение о том, что грибковые заболевания, вызывая аллергическую перестройку организма и, в частности, сосудистой системы, могут приводить к поражению кровеносных сосудов в виде аллергических васкулитов. Картина этих сосудистых изменений не отличается от проявлений аллергических васкулитов другого происхождения.

Таким образом, приведенные данные клинических наблюдений и экспериментальных исследований свидетельствуют о том, что развитие сосудистой аллергии может быть обусловлено и сенсибилизирующим действием грибковой инфекции. Как отмечено, от многих больных аллергическими васкулитами выделены и идентифицированы патогенные грибы (нередко несколько видов), обладающие выраженными аллергизирующими свойствами.

Получение культур, положительные и резко положительные внутрикожные тесты (в ряде случаев и положительная РСК) с грибковыми антигенами подтверждают положение об участии этих микроорганизмов в аллергических сосудистых реакциях. В связи с этим среди этиопатогенетических факторов в развитии аллергических васкулитов значительное место должно отводиться микозам (особенно висцеральному кандидозу). Успех возможен лишь при назначении комплексной терапии — санации микоза, проведении десенсибилизации (специфической и неспецифической).

В современных условиях роста сердечно-сосудистых заболеваний, их утяжеления следует учитывать и роль грибковых микроорганизмов при этом.

Однако, чаще в развитии аллергических процессов в сосудистой стенке патогенные грибы выступают в роли со-аллергенов (смешанные, сочетанные влияния — микробная или полимикробная+ грибковая аллергия; лекарственная+грибковая аллергия; грибковая аллергия+охлаждения и другие парааллергические факторы и т.д.).

Для подтверждения роли некоторых патогенных грибов в развитии сосудистой аллергии нами были проведены эксперимертальные исследования в «чистом виде» — т.е. с использованием в качестве сенсибилизирующей субстанции только грибковых препаратов. Полученные результаты подтвердили положение об аллергизирующем влиянии патогенных грибов и их значении в развитии и поддержании сосудистой аллергии.

Как отмечено, самыми распространенными грибковыми заболеваниями среди населения остаются микозы стоп («эпидермофития») и кандидоз. Установлено, что параллельно со значительным распространением грибковых заболеваний (прежде всего микозов стоп и онихомикозов) во всем мире значительно увеличилось также и число клинических проявлений аллергии к грибам (WHO, 2002).

Учитывая это, мы сочли целесообразным остановиться на краткой характеристике особенностей аллергических процессов, связанных с патогенными и сапрофитными грибами — возбудителями именно этих форм микозов, тем более, что проявления аллергии при них очень разнообразны и динамичны.

Кулага В.В., Романенко И.М., Афонин С.Л., Кулага С.М.
Похожие статьи
показать еще
 
Аллергология и иммунология