Лабораторные методы исследования. Лейкоцитурия (пиурия)

30 Января в 21:19 10505 0


В зависимости от количества лейкоцитов, содержащихся в моче, применяют два термина: пиурия и лейкоцитурия.

Пиурия

Пиурия — макроскопически выявляемое наличие гноя в моче.

Присутствие гноя в свежевыпущенной моче доказывается диффузным ее помутнением, наличием комочков, хлопьев и нитей, не исчезающих после ее подогревания и добавления в нее нескольких капель 10 % раствора хлористоводородной иди уксусной кислоты, а также микроскопией осадка мочи.

Клинически выделяют три вида пиурии: 1-ю — начальную (инициальную), 2-ю — конечную (терминальную), 3-ю — полную (тотальную).

Источником пиурии могут быть паренхима почки, почечная лоханка, мочеточники, мочевой пузырь, мочеиспускательный канал или мужские половые органы (предстательная железа, семенные пузырьки), откуда при воспалительном процессе лейкоциты проникают в мочевые пути. Гной в моче появляется при вскрытии в мочевой пузырь гнойников параметрия, аппендикулярного абсцесса и т.д. Ориентировочно установить источник пиурии можно с помощью трехстаканной пробы. Больной мочится поочередно в 3 стакана, и содержимое каждого из них исследуют макро- и микроскопически.

Наличие гнойной мочи только в 1-м стакане (инициальная пиурия) указывает на воспалительный процесс в уретре, 3-м (терминальная пиурия) — на воспалительный процесс в предстательной железе или семенных пузырьках. Наличие гноя во всех 3 стаканах (тотальная пиурия) является признаком воспалительного процесса в почке, почечной лоханке, мочевом пузыре или гнойного очага, вскрывшегося в мочевые пути. Важно, чтобы при проведении данной пробы в мочевом пузыре содержалось достаточное количество мочи.

Поэтому больного нужно предупредить, чтобы он предварительно не мочился несколько часов. Отличить почечную пиурию от пузырной можно путем промывания мочевого пузыря. При локализации воспалительного процесса в почке промывание мочевого пузыря не влияет на степень пиурии, а при локализации в мочевом пузыре она становится менее выраженной.

Лейкоцитурия

У здоровых людей в моче постоянно содержится небольшое количество лейкоцитов. О лейкоцитурии принято говорить, если в осадке мочи содержится 6 и больше лейкоцитов в поле зрения микроскопа. В выявлении лейкоцитурии исключительно важное значение имеет методика сбора мочи. У женщин моча может быть загрязнена во время акта мочеиспускания выделениями из влагалища, у мужчин - из препуциального мешка, у девочек - из вульвы. Поэтому мочу следует собирать после тщательной обработки наружных половых органов и наружного отверстии уретры антисептическими растворами.

Для получения сравнимых результатов при микроскопическом исследовании осадка мочи соблюдают стандартные условия. Берут постоянно одно и то же количество (10 мл) предварительно тщательно перемешанной мочи и центрифугируют ее в одинаковых условиях (5 мин при 2000 об/мин). Затем быстрым наклоном пробирки сливают прозрачный верхний слой, а оставшийся осадок переносят пипеткой с тонко оттянутым концом на середину предметного стекла и накрывают покровным.

Осадок мочи исследуют при спущенном конденсоре или суженной диафрагме микроскопа. Препарат вначале просматривают при малом увеличении (окуляр 7 или 10, объектив 7), а затем при среднем (окуляр тот же, объектив 40). Определяют количество лейкоцитов и других форменных элементов в поле зрения микроскопа при среднем увеличении.

Количественные методы выявления лейкоцитурии

Правильно интерпретировать полученные данные при небольшом количестве лейкоцитов в осадке мочи бывает нелегко, так как содержание лейкоцитов определяется трудно учитываемыми сведениями: небольшим числом лейкоцитов в поле зрения (3—7, 2—8 и т.д.), скоплениями в слизи до числа лейкоцитов, которые с трудом можно сосчитать. Учитывая это, в настоящее время в сомнительных случаях применяют количественные методы выявления лейкоцитурии. Они заключаются в подсчете количества лейкоцитов в определенном объеме мочи или в моче, выделенной больным за определенный период времени.

Так, например, определяют количество форменных элементов в моче, выделенной за сутки (метод Каковского—Аддиса), за 1 ч (метод Рофе), за 1 мин (метод Амбюрже); содержание лейкоцитов в 1 мл мочи (метод Нечипоренко) или в 1 мм3 нецентрифугированной мочи (метод Стансфилда—Уэбба). В основе всех количественных методов исследования лежит определение числа форменных элементов (отдельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров) в 1 мм3 осадка мочи с помощью счетной камеры (гемоцитометра).

Метод Каковского—Аддиса

В 1910 г. А.Ф.Каковский первым предложил заменить обычный метод исследования осадка мочи более точным количественным определением в нем форменных элементов. Спустя 15 лет Аддис (1925) предложил методику определения форменных элементов в суточной моче, во многом аналогичную методу Каковского. Мочу собирают в течение 10 или 12 ч, удобнее всего ночную порцию (с 22 до 8 ч утра).

Если больной за это время опорожняет мочевой пузырь неоднократно, то для предотвращения форменных элементов от разрушения необходимо добавлять в сосуд с мочой 4—5 капель формальдегида или другой стабилизатор. Из общего количества выделенной за это время мочи для центрифугирования берут такое, которое больной выделил за 12 мин, т.е. за 1/5 ч. Это количество определяют по формуле:

Х=V/(t·5)

где Х — количество мочи, выделенное за 12 мин (мл); V — количество мочи, собранной за 10-12 ч (мл); t — время, в течение которого собирали мочу для исследования (ч); 5 — число, на которое нужно разделить результат, чтобы получить объем мочи, выделенной за 1/5 ч, т.е. за 12 мин.

Мочу центрифугируют в градуированной пробирке 5 мин — при 2000 об/мин. 1 мл мочи оставляют в пробирке, не нарушая осадка. Осадок смешивают с оставленной мочой и каплю взвеси помещают в камеру Горяева для подсчета форменных элементов в 1 мм3. Лейкоциты подсчитывают в 100 больших квадратах, что соответствует 1600 маленьких квадратов сетки Горяева.

Поскольку основной счетной единицей камеры Горяева, как и большинства других счетных камер, является маленький квадрат, объем которого равен 1/4000 мм3, лейкоциты подсчитывают в 1 мм3 осадка мочи по общей для всех количественных методик формуле:

Х=(a·4000)/b

где X — количество лейкоцитов в 1 мм3 осадка мочи; а — количество лейкоцитов в 100 больших квадратах; b — количество маленьких квадратов, в которых подсчитывались лейкоциты.

Зная количество лейкоцитов в 1 мм3 осадка мочи, легко вычислить их наличие в суточном количестве мочи по формуле:

Н = х·1000·5·24,

где Н — количество лейкоцитов в суточной моче, х — количество лейкоцитов в 1 мм3 осадка мочи. Количество лейкоцитов умножают на 1000, так как для исследования оставляли 1 мл (1000 мм3) осадка мочи. Полученное число будет означать количество лейкоцитов в моче, выделенной за 1/5 ч, так как осадок получен при центрифугировании из этого количества мочи. Для установления количества лейкоцитов в суточной моче полученное число умножают на 5 (за 1 ч) и на 24 (за 24 ч). Так как 1000, 5 и 24 являются постоянными величинами, для определения количества лейкоцитов в суточной моче необходимо количество лейкоцитов в 1 мм3 осадка мочи умножить на 120 тыс.

Недостатками пробы являются ее обременительность для больного и персонала, а также невозможность определения источника лейкоцитурии, поскольку не исключается попадание гноя из наружных половых органов, мочеиспускательного канала и предстательной железы.

Метод Амбюрже

Hamburger и соавт. (1954) видоизменили описанную методику. Мочу собирают за 3 ч, измеряют выделенное количество и берут из нее 10 мл в градуированную пробирку. Центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин. Мочу отсасывают, оставляя 1 мл вместе с осадком. Осадок перемешивают и 1 каплю взвеси переносят в гемоцитометр, где подсчитывают число форменных элементов в 1 мм3 осадка мочи. Количество лейкоцитов, выделенных за 1 мин, определяют по формуле:

H=(x·1000·V)/(S·t)

где Н — количество лейкоцитов, выделенных с мочой за 1 мин; х — количество лейкоцитов и 1 мм3 осадка мочи; S — количество мочи, взятое для центрифугирования (мл); V — количество мочи, выделенное больным за 3 ч (мл); t — время собирания мочи (мин).

Метод Рофе

Rofe (1955) рекомендовал определять количество форменных элементов в моче, выделенной за 1 ч по той же формуле, но только t (время собирания мочи) учитывают в часах, а не в минутах. Он считал, что в этом случае принимают во внимание различия в количестве выделяемой мочи, которые особенно выражены у больных с нарушенной концентрационной способностью почек.

Метод Нечипоренко

Наибольшее распространение в нашей стране получил метод подсчета форменных элементов в 1 мл мочи, предложенный в 1961 г. А. З. Нечипоренко. Берут 10 мл мочи, центрифугируют и оставляют в пробирке 1 мл мочи вместе с осадком (как и при проведении других количественных методик). Определяют содержание форменных элементов в 1 мм3 осадка мочи, а затем вычисляют количество лейкоцитов в 1 мл мочи по формуле:

Н = (х·1000)/S

где Н — количество лейкоцитов в 1 мл мочи; х — количество лейкоцитов в 1 мм3 осадка мочи; S — количество мочи, взятой для центрифугирования (мл).

Применение метода Нечипоренко в повседневной практике на протяжении многих лет показало его преимущество во многих отношениях. Во-первых, он не обременителен для больного и персонала, поскольку не нужно собирать мочу за строго определенный промежуток времени и определять ее количество. Во-вторых, его можно использовать для исследования небольшого количества мочи, полученного из почки при катетеризации мочеточников.



В-третьих, результаты исследования получают значительно быстрее, чем при применении других методик количественного определения лейкоцитурии. В-четвертых, методика позволяет исследовать среднюю порцию мочи, что исключает попадание гноя из мочеиспускательного канала, предстательной железы и семенных пузырьков, что имеет принципиальное значение при выявлении источника лейкоцитурии.

Метод Стансфилда—Уэбба

В тех случаях, когда моча подучена из лоханки почки и количество ее невелико (1—2 мл), можно определить количество форменных элементов в 1 мм3 нецентрифугированной мочи по методу Stansfield и Webb (1953). Они считают, что этот метод исследования дает столь же хорошие результаты, как и другие методы определения степени лейкоцитурии, но значительно проще их. Камеру Горяева заполняют хорошо смешанной нецентрифугированной мочой и подсчитывают число форменных элементов в 1 мм3 мочи по формуле:

Х=(a·4000)/b

где X — количество лейкоцитов в 1 мм3 осадка мочи; а — количество лейкоцитов в 100 больших квадратах; b — количество маленьких квадратов, в которых подсчитывались лейкоциты.

Границы нормальных и патологических показателей лейкоцитурии довольно относительны. Для интерпретации полученных данных следует учитывать нормальные и патологические показатели лейкоцитурии при применении различных количественных методик.

Показатели лейкоцитурии в норме и при патологии при применении различных количественных методик [Рябинский В.С., 1969]
yrol_11.jpg

Морфологические исследования лейкоцитов мочи

Клетки Штернгеймера—Мальбина

С целью определения источника лейкоцитурии и степени активности воспалительного процесса применяется метод суправитальной окраски осадка мочи, который предложили в 1949 г. R.Stemheimer и B.I.Malbin. Штернгеймер и Мальбин показали, что лейкоциты мочи отличаются друг от друга по внешнему виду и в зависимости от морфологических особенностей окрашиваются специальной краской (водно-алкогольная смесь 3 частей генцианвиолета и 97 частей шафранина) либо в красный, либо в бледно-голубой цвет. Лейкоциты, окрашенные в голубой цвет, бывают двух видов.

Лейкоциты первого вида не отличаются от обычных сегментоядерных. Лейкоциты второго вида увеличены в размере в 2— 3 раза, округлой формы, иногда с вакуолизацией протоплазмы. Их ядро многодольчатое или представляется разделенным на 2—3 сферических ядра и обычно темнее протоплазмы. Гранулы протоплазмы этих лейкоцитов находятся в состоянии броуновского движения.

Лейкоциты второго вида принято именовать клетками Штернгеймера—Мальбина. Они представляют собой обычные жизнеспособные сегментоядерные нейтрофильные лейкоциты, проникающие в мочу из очага воспаления в почечной паренхиме и меняющие вид и форму в строго определенных условиях, среди которых наиболее важными являются изменения осмотических свойств мочи и осмотической резистентности лейкоцитов, попавших в мочу.

Клетки Штернгеймера—Мальбина обнаруживают примерно у 50 % больных острым пиелонефритом и у 25 % больных хроническим пиелонефритом. Клетки Штернгеймера—Мальбина не являются патогномоничными для пиелонефрита, поскольку могут содержаться в секрете предстательной железы, выделениях из влагалища. Если попадание в мочу секрета предстательной железы и влагалищного содержимого исключено, то клетки Штернгеймера—Мальбина указывают на наличие неспецифического воспалительного процесса в почке и его активность, так как лейкоциты данного вида практически отсутствуют в моче при остром и хроническом цистите.

Активные лейкоциты

В связи с тем что жизнеспособные лейкоциты превращаются в моче в клетки Штернгеймера-Мальбина лишь при низкой осмотической концентрации и поэтому далеко не всегда могут быть обнаружены. В.С.Рябинский и В.Е.Родоман (1966) предложили методику исследования в осадке мочи активных лейкоцитов. Метод основан на том, что жизнеспособные лейкоциты, попавшие в мочевые пути из очага воспаления в почке, обязательно превращаются в моче с низким осмотическим давлением в крупные клетки с подвижностью гранул их протоплазмы.

Мочу у больных получают при самостоятельном мочеиспускании из средней порции после обработки наружных половых органов и наружного отверстия уретры дезинфицирующим раствором. К осадку центрифугированной мочи добавляют 1 каплю краски следующего состава: эозина — 250 мг, 1 % фенола 2 мл, 40 % формалина 0,5 мл, глицерина 10 мл, дистиллированной воды 87,5 мл. Ю.А.Пытель и С.Б.Шапиро (1970) рекомендуют производить окраску осадка мочи с помощью 1 % водного раствора метиленового синего. Осадок исследуют под микроскопом при увеличении в 800—900 раз.

При отсутствии клеток Штернгеймера—Мальбина к осадку мочи добавляют равное количество дистиллированной воды, содержимое пробирки смешивают и повторно исследуют под микроскопом спустя 5—7 мин. О наличии активных лейкоцитов свидетельствует появление крупных светло-голубых лейкоцитов с подвижными гранулами в протоплазме. Активные лейкоциты обнаруживают у 87,8 % больных острым пиелонефритом и у 79,8 % больных хроническим пиелонефритом. Они отсутствуют в моче лишь при полной окклюзии мочеточника или в стадии ремиссии хронического пиелонефрита.

Особенно важное диагностическое значение активные лейкоциты имеют в серозной стадии острого пиелонефрита, когда в почке отсутствуют деструктивные изменения и незначительная лейкоцитурия обусловлена проникновением жизнеспособных лейкоцитов из очага воспаления в межуточной ткани почки через сохранившие анатомическую целость канальцы в просвет нефрона.

Исследование профиля лейкоцитурии

При исследовании осадка мочи больных после трансплантации почек Б.В.Петровский и соавт, (1969) обнаружили преобладание лимфоцитов. В.П.Ситникова и соавт. (1973) отметили, что при пиелонефрите у детей преобладает нейтрофильный профиль лейкоцитурии, а при гломерулонефрите — лимфоцитарный. Это позволяет использовать исследование профиля лейкоцитурии при дифференциальной диагностике различных нефропатий, а также при отличии реакции отторжения от гнойно-воспалительного процесса в пересаженной почке.

Методика исследования заключается в следующем. Собирают среднюю порцию мочи, центрифугируют в течение 5 мин при 2000 об/мин, сливают надосадочную жидкость.

К осадку добавляют 2 капли метанола для предотвращения paзрушения клеток при высушивании. Небольшое количество осадка помещают тонким слоем на предметное стекло. Высушенный мазок фиксируют в метаноле несколько минут и окрашивают в течение 5—10 мин красителем Гимзы. Промытый и высушенный мазок исследуют под иммерсионной системой микроскопа с подсчетом лейкоцитарной формулы. Для получения правильных результатов необходимо, чтобы ОПМ была не ниже 1,012—1,014, рН мочи в пределах 5,0—6,5 и лейкоцитарная формула определялась при подсчете не менее 100 клеток.

Методы выявления скрытой лейкоцитурии

При наличии активного хронического воспалительного процесса в почке лейкоцитурии и активных лейкоцитов в осадке мочи не отмечается. Отсутствие изменений в моче и клинически выраженного обострения нередко ставит практического врача в затруднительное положение, особенно если нет характерных для хронического пиелонефрита изменений по данным других методов исследования.

В связи с этим с целью выявления скрытой лейкоцитурии стали применять провокационные пробы, которые позволяют получить у больных хроническим пиелонефритом увеличенное количество лейкоцитов в моче. В настоящее время применяют пирогенный, преднизолоновый, парафиновый, нафталановый, озокеритовый и другие провокационные тесты.

Пирогенный тест

Пирогенный тест впервые применили Pears и Houghtorn в 1958 г. Они вводили внутривенно препарат пирексал, который вызывает кратковременную лихорадку и провоцирует выделение лейкоцитов из очага воспаления в почке в мочу. Н.Г.Мкервали (1968) применила в качестве пирогенного вещества пирогенал. Пирогенал вводят внутримышечно в количестве 50 мкг после сбора утренней порции мочи. Затем собирают 3-часовые порции мочи и одну порцию мочи через 24 ч после введения препарата.

В каждой порции определяют количество форменных элементов в 1 мл мочи, а также клетки Штернгеймера—Мальбина, или клетки активных лейкоцитов. В связи с часто возникающими побочными реакциями и осложнениями при введении пирогенных веществ (тяжелая лихорадка, озноб, тошнота, рвота, головные (боли, слабость, артралгии и т.д.) пирогенные тесты не нашли широкого Практического применения.

Преднизолоновый тест

Кац, Веласкес и Бордо (1962) предложили заменить пирогенный тест преднизолоновым. Они установили, что кортикостероиды, аналогично пирогенным веществам, провоцируют выделение лейкоцитов с мочой. Преднизолоновый тест проводят по следующей методике. Утром собирают среднюю порцию мочи при самостоятельном мочеиспускании. После этого медленно в течение 3—5 мин вводят внутривенно 30—50 мг (в зависимости от массы больного) преднизалона, разведенного в 10 мл изотонического раствора хлорида натрия. Примерно через 3—4 ч после введения преднизолона и на следующее утро аналогичным образом собирают мочу на исследование.

Определяют количество лейкоцитов и других форменных элементов в 1 мл каждой порции мочи, а также наличие в осадке мочи клеток Штернгеймера—Мальбина, или активных лейкоцитов. Тест считается положительным при содержании свыше 4000 лейкоцитов в 1 мл мочи после введения преднизолона и появлении в осадке мочи клеток Штернгеймера—Мальбина, или активных лейкоцитов.

Н.А. Лопаткин
Похожие статьи
показать еще
 
Урология