Диагностика эктопии шейки матки. Микроскопическое исследование

18 Апреля в 16:54 3685 0


Наиболее широко распространенным методом при диагностике трихомоноза является микроскопическое исследование влагалищного содержимого и мочи путем изучения нативных препаратов или окрашенных мазков (по Романовскому-Гимзе или метиленовым синим). Возможно использование культурального, а также люминисцентного методов.

Кольпоскопия при трихомонозе нередко обнаруживает картину очагового или «пятнистого» кольпита: красные и желтые точки, создающие выпуклые участки в результате выступания лимфоидных фолликулов из-под эпителиальной зоны. Цитогистологических признаков трихомониаза не выявлено.

Кислотно-щелочное равновесие (КЩР) является одним из важнейших показателей гомеостаза организма. Оно оценивается на основании величины рН. Среднее значение рН влагалищного содержимого у здоровых женщин - 4,2±0,2. Оно может значительно меняться в зависимости от характера микробиоценоза влагалища. Так, например, при генитальном кандидозе рН влагалищного содержимого меньше 4,5, а при бактериальном вагинозе — больше 4,5.

Цервикальная слизь в норме имеет значение рН, равное 7,0—8,0. Изменению рН цервикальной слизи могут способствовать различные факторы: кислая среда влагалища, патогенная микрофлора при наличии воспалительных процессов, гормональные нарушения в организме женщины. По мнению И.Ю. Кузьминой и Б.Е. Гречанина (1986), не выяснено, является ли эктопия следствием изменения биохимических свойств цервикальной слизи, разрушающей нормальный многослойный плоский эпителий влагалищной части шейки матки, или, возникнув, она сама изменяет качественные характеристики слизи.

У женщин с эктопией шейки матки рН цервикальной слизи имеет более высокие показатели, чем у здоровых женщин, однако сохраняет такую же тенденцию колебаний в различные фазы менструального цикла, оставаясь наиболее высоким в фазе овуляции (8,2+0,1), что позволяет говорить о частично компенсированном метаболическом алкалозе цервикальной слизи при эктопии (Кузьмина И.Ю., Гречанин Б.Е., 1986).

Иммунологический метод исследования (изучение состояния местного, клеточного и гуморального иммунитета) считается вспомогательным в диагностике эктопии шейки матки. Основанием для его применения является факт частого сочетания эктопии с воспалительными процессами шейки матки, рецидивирование эктопии после лечения, а также сведения о снижении иммунной защиты у больных с предопухолевыми заболеваниями шейки матки и о постоянной стимуляции иммунной системы у женщин с хроническим воспалительным процессом гениталий вне обострения (Запорожан В.Н., 1997; Schafer A. et al., 1991; и др.).

И.Б. Манухин и Г.Н. Минкина (1994) установили, что местный иммунитет не изменен при эктопиях цилиндрического эпителия шейки матки, невыраженные его нарушения имеются при дисплазиях, резкое же снижение местного иммунитета характерно для больных с папилломавирусной инфекцией. С.А. Муканова (1989) показала, что при эктопии происходит активация местного иммунитета, причем показатели иммуноглобулинов в шеечной слизи не коррелируют с показателями гуморального иммунитета.

Рядом исследователей показана зависимость содержания Ig А и Ig G от гормонального влияния и фаз менструального цикла. Доказано, что содержание Ig A, Ig G и Ig М в цервикальной слизи женщин с воспалительными процессами шейки матки довольно объективно отражает стадию и тяжесть воспалительного процесса и нередко служит критерием клинического выздоровления (Антонова Л.В. и др., 1977; Пономарева Ю.Н., 2001; и др.).

Иммуноморфологические исследования при эктопии также свидетельствуют о реактивности процесса в строме шейки матки и о возможном влиянии содержания иммуноглобулинов на процессы, поддерживающие существование эктопии и провоцирующие их рецидивы (Возникевич И.Г. и др., 1991; Куперт А.Ф., 1985).

Состояние клеточного иммунитета при эктопии в доступной нам литературе практически не освещено. Имеются только единичные сведения о том, что развитие доброкачественных заболеваний шейки матки происходит на фоне снижения функциональной активности Т-системы иммунитета и раздражения системы В-лимфоцитов, что проявляется усиленным синтезом иммуноглобулинов (Гречанин Б.Е., 1967).

Для оценки гуморального иммунитета в иммунологических лабораториях исследуют периферическую кровь женщин, забранную в утренние часы. Определяют содержание Ig А, Ig G, Ig М методом простой радиальной иммунодиффузии по Mancini (Mancini G. et al., 1965). Для оценки состояния клеточного иммунитета существует множество методик. Наиболее доступные - это определение содержания Т-, В-, О- лимфоцитов в периферической крови в реакции спонтанного розеткообразования методом Mendes et al. (Mendes N.E et al., 1974) и выявление иммунорегуляторных субпопуляций клеток по их чувствительности к теофиллину по А.Ф. Блюгеру с соавт. (1980).

Для оценки состояния местного иммунитета обычно определяют содержание Ig A, Ig А секр., Ig G, Ig М в цервикальной слизи в I и во II фазы менструального цикла, используя методику радиальной иммунодиффузии по Mancini в модификации Е.В. Чернохвостовой с соавт. (Чернохвостова Е.В. и др. 1975) с антисыворотками к отдельным классам иммуноглобулинов в соответствии с рекомендациями Л.В.Антоновой с со
авт. (1977).

Изучение функционального состояния гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы. Определенное значение возникновении и течении эктопии шейки матки имеет co-стояние функции гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы. Об этом свидетельствуют данные многочисленных исследований: наличие возрастных изменений шейки матки при эктопии, появление резервных клеток в онтогенезе под влиянием эстрогенов, изменение в экзоцервиксе во время беременности.

Имеется ряд интересных исследований, направленных на изучение состояния экзо- и эндоцервикса при нормальном и нарушенном менструальном цикле, при применении экзогенных стероидных гормонов, а также на изучение состояния цитогормонального фона при опухолевых заболеваниях шейки матки (Жаров Е.В. и др., 2000; Мамасьян О.В., 2000 Назарова Н.М., 1992; и др.). Результаты этих работ косвенно свидетельствуют о связи эктопии и дисплазии с гормональным фоном в организме женщин.

Данные эндокринологического исследования показывают, что при эктопии сохраняется цикличность выделения эстрогенов с умеренным снижением их содержания (Грэждиеру П.В., 1977), преобладает гипоэстрогенный тип мазков и пониженная экскреция| суммарных эстрогенов и прегнандиола в суточной моче как| в период овуляции, так и в период расцвета лютеиновой фазы (Рудакова Е.Б., 1996). Для эктопии характерны монотонно низкое содержание ФСГ и Л Г и нарушение соотношения ФСГ / ЛГ в сторону снижения, что свидетельствует о недостаточной базальной выработке гонадотропных гормонов, особенно ФСГ (Богданова Т.В., 1986).

Функциональная активность гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы оценивается по совокупности результатов изучения кривых базальных температур, кольпоцитологических и гормональных исследований.

Методики исследования кривых базальных температур и кольпоцитологического исследования стандартны и детально разработаны. Гормональное исследование проводится радиоимунологическим и иммуноферментным методами с использованием стандартных наборов реактивов и тест-систем.

В нашей работе использовались различные методики.



Кольпоскопическое исследование выполнялось по общепринятому методу. Интерпретацию кольпоскопических данных осуществляли с использованием международной терминологии.

В асептических условиях шейку матки обнажали в зеркалах, фиксировали пулевыми щипцами за переднюю губу, независимо от используемой среды расширения. После зондирования полости матки без расширения цервикального канала вводился гистероскоп с истекающей из него средой для расширения полости матки. В ряде случаев требовалось расширение цервикального канала до №5,5 расширителями Гегара, что делало необходимым введение в цервикальный канал местных анестезирующих средств (1% раствор лидокаина). В дальнейшем проводили цитологическое или гистологическое исследование полученного материала.

Гистеро- и цервикоскопию проводили по общепринятой методике.

Цитологическое исследование мазков-отпечатков с шейки матки и нижней трети цервикального канала, полученных шпателем Эйра, проводилось после их окрашивания гематоксилином и эозином. При оценке полученных данных использовали Международную терминологию.

Бактериоскопическое исследование мазков содержимого влагалища, цервикального канала и уретры проводили после окрашивания по Грамму. Кроме неспецифической микрофлоры этим методом выявляли возбудителей трихомониаза и кандидоза.

Бактериологическое исследование влагалищного содержимого и отделяемого шейки матки выполнялись в соответствии с приказом Министерства здравоохранения СССР №535 от 22.04.85 г. Идентификацию выросших микробных культур проводили по морфологическим, культуральным и биохимическим признакам.

Для диагностики хламидийной инфекции использовали серологические исследования на хламидиоз в РСК при 4°С микрометодом по модифицированной методике Колгера с антигеном Одесского НИИ ВС; цитологическое исследование мазков из уретры и цервикального канала после окраски по Романовскому-Гимзе; метод флюоресцирующих антител (МФА) с применением люминисцирующих родоспецифических мышиных моноклональных антител к групоспецифическому монополисахариду хламидий, производимых СП «НИАРМЕДИК» при НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалея РАМН.

Для диагностики микоплазменной (уреаплазменной) инфекции использовали цветной тест на уреазную активность основанный на способности этих микроорганизмов расщеплять мочевину, входящую в состав жидкой среды, что приводит к изменению рН последней и цвета индикаторной системы от лимонно-желтого до зеленого или синего использовали методику посевов на искусственную питательную среду М.А.Башмаковой.

Для диагностики генитальной вирусной инфекции (вирус папиломы человека, вирус герпеса тип-2) использовали цитологическое исследование мазков из уретры, эндоцервикса, заднего свода влагалища, а также метод световой и электронной микроскопии биоптатов шейки матки.

Для диагностики бактериального вагиноза использовали амино-тест, определяли рН влагалищного и цервикального содержимого с помощью бумажных индикаторов, бактериоскопическое исследование влагалищных мазков.

Для изучения состояния функциональной активности гипоталамо-гипофизарно-яичниковой системы применялось исследование кривых базальных температур, кольпоцитологическое и гормональное исследования.

Исследование кривых базальных температур выполнялось по общепринятой методике.

Кольпоцитологическое исследование проводилось на 8—10, 14—16, 19—21 дни менструального цикла с подсчетом КПИ и ИС, согласно рекомендациям И.Д. Арист (1967), М.Г. Арсеньевой (1977) и др.

Гормональное исследование: определение содержания гормонов (эстрадиола, прогестерона, тестостерона, Л Г, ФСГ, пролактина) в сыворотке крови определяли на 7—9, 19—21 дни менструального цикла радиоиммунологическим методом с использованием стандартных тест-наборов.

Иммунологическое исследование. Для оценки гуморального и клеточного иммунитета исследовали периферическую кровь женщин, забранную в утренние часы. Содержание Ig А, Ig G, Ig М определяли методом простой радиальной иммунодиффузии по J.Mancini (1965), содержание Т-, В-лимфоцитов в периферической крови — в реакции спонтанного розеткообразования методом N.F. Mendes et al. (1974), а иммунорегуляторные субпопуляции клеток выявляли по их чувствительности к теофиллину согласно рекомендациям А.Ф. Блюгера и др. (1980). Для оценки состояния местного иммунитета определяли содержание Ig A, slg A, Ig G, Ig М в цервикальной слизи в I и во II фазы менструального цикла, используя методику радиальной иммунодиффузии по J.Mancini (1965) в модификации Е.В. Чернохвостовой и др. (1975) с антисыворотками к отдельным классам иммуноглобуллинов человека.

Гистологическое исследование биоптатов шейки матки проводилось после фиксирования их в 10% растворе формалина и окрашивания их парафиновых срезов гематоксилином и эозином.

Иммуногистохимическое исследование биоптатов шейки матки проводили после их фиксации в 10% растворе формалина. Парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Для идентификации клеток воспалительного инфильтрата применена окраска по Браше. На парафиновых срезах прямым методом Кунса устанавливали количество Ig А-, Ig G-, Ig М-продуцирующих плазматических клеток. Фиксированные иммунные комплексы выявляли методом Гольдвассера-Шепарда в криостатных срезах, отмытых предварительно забуферным (рН 7,2—7,4) физиологическим раствором. Иммунопероксидазным методом определяли slgA, С04-клетки (Т-хелперы), CD8-mieTKH (Т-супрессоры), а также экспрессию HLA/DR-антигенов (поликлональные антитела фирмы «Диагнотех»).

Электронно-микроскопическое исследование биоптатов шейки матки осуществлялось после фиксации их в 4% растворе параформальдегида с постфиксацией 1% раствором четырехокиси осмия и последующей обработки в смеси эпона и аралдита. Из всех блоков готовили полутонкие срезы, которые окрашивали азуром-2, и выборочно-ультратонкие срезы. Ультратонкие срезы контрастировали уранилацетатом и цитратом свинца.

Радиоавтографическое исследование проводилось для изучения процессов структурного обновления ткани в очаге эктопии шейки матки. Метод основан на введении в исследуемый объект радиоактивного метаболита и выявлении места его включения путем фотографической регистрации излучения. Метод радиоавтографического исследования использован нами в варианте, предложенном Д.С. Саркисовым и др. (1980). Для оценки синтеза ДНК и пролиферативной возможности исследуемой клеточной популяции применяли Н-тимидин (удельная радиоактивность 24 Ки/мМ) в концентрации 100 мк Ки/мл. В качестве меченого предшественник РНК применяли Н-уридин (удельная радиоактивное 26,6 Ки/мМ) в концентрации 200 мк Ки/мл.

Количественная оценка результатов (уровень пролифертивной активности эпителия) проводилась по методике предложенной О.И.Епифановой и В.В.Терских (1983). Мечеными считались клетки, если над ядром выявлялись 3—5 зерен серебра при применении фотоэмульсии марки «М» чувствительностью 0,2 ед.

Кислотность влагалищного и цервикального содержимое определяли рН — электрометром тип 2512 (Венгрия) и с помощью бумажных индикаторов.

В.Н. Прилепская, Е.Б. Рудакова, А.В. Кононов
Похожие статьи
показать еще
 
Акушерство и гинекология