Специфика методологии исследований дренажной зоны

15 Июня в 16:58 511 0


Классическая методика исследования морфологии дренажной зоны глаза - световая микроскопия целлоидиновых или парафиновых срезов тканей. Варианты их приготовления отличаются, главным образом, направлением проведения среза. Наиболее часто применяют меридиональные срезы, позволяющие одновременно наблюдать большинство отделов глазного яблока. Однако, как указывал M. Flocks (1956), на меридиональных срезах видны только поперечные сечения структур дренажной зоны глаза, по которым затруднительно судить об их пространственном расположении.

Исследование тангенциальных (параллельных или касательных к поверхности глазного яблока) срезов дренажной зоны глаза позволило уточнить морфологию различных отделов трабекулярной сети (M. Flocks, 1956) и обнаружить ряд неизвестных ранее образований, например, систему сухожилий цилиарной мышцы (J.W. Rohen, 1982).

Вместе с тем, методика, основанная на изучении срезов тканей, имеет существенный недостаток: в пределах одного среза могут близко располагаться совершенно разнородные ткани, создавая видимость тесного контакта и даже соединения тканей, и, наоборот, по-настоящему анатомически связанные друг с другом структуры могут оказаться в разных срезах.

Многослойная структура будет адекватно представлена на гистологическом срезе только в том случае, если составляющие её слои лежат на достаточном протяжении в одной плоскости. В реальных биологических объектах большинство элементов криволинейны. Поэтому обычный гистологический срез многослойного объекта будет заключать в себе части различных слоёв.

В определённой мере пространственное взаиморасположение тканей может быть восстановлено синтезом трёхмерной структуры объекта из набора серийных срезов. Однако, этот достаточно трудоёмкий метод не даёт представления о биомеханических свойствах изучаемых тканей, о переходе различных волокон из одной структуры в другую.

Касаясь этого вопроса, М. Зальцман (1913) отмечал, что «...способы анатомического препарирования, равно как и расщипанные препараты отнюдь не следует оставлять без внимания. Они показывают нам элементы тканей в гораздо более естественном состоянии и позволяют делать лучшие заключения по вопросам гистологии, чем срезы. Подобный ... препарат позволит сделать заключения, которых нельзя вывести из сотен срезов».

При комбинации гистологических методов с анатомическими (препарированием) «...особенно успешно приобретается пространственное представление о структуре тканей и их элементов» (М. Зальцман, 1913). «Расщипанные» препараты элементов дренажной зоны исследовали J. Assayama (1901-1902), М. Зальцман (1913), J.S. Speakman (1959). Развитием этой методики на современном этапе является метод микропрепаровки, использованный Н.В. Косых и Н.Е. Турок (1997) для исследования эмбриональных глаз.



В нашем исследовании были использованы как метод микропрепаровки, так и меридиональные срезы. Для исследования трёхмерной топографии трабекулярной сети методика микроанатомической препаровки (J. Assayama, 1901-1902; М. Зальцман 1913; J.S. Speakman, 1959; Н.В. Косых, Н.Е. Турок, 1997) была модифицирована нами на основе современной микрохирургической техники: операций синусотомии (М.Л. Краснов, 1964; М.М. Краснов, 1988; Б.Н. Алексеев, 1978, Б.Н. Алексеев, С.Ф. Писецкая, 1985) и непроникающей глубокой склерэктомии (С.Н. Фёдоров и соавт., 1989).

Часть глазных яблок была препарирована в соответствии с методикой операции непроникающей глубокой склерэктомии (НГСЭ) (С.Н. Фёдоров и соавт, 1989) с репозицией и шовной фиксацией склерального лоскута и покрытием зоны операции конъюнктивой (выбирали глазные яблоки с достаточными размерами оставшегося после энуклеации венчика конъюнктивы). По окончании препаровки перфузионным раствором наполняли интрасклеральную полость и аналог фильтрующей подушечки, что имитировало реальную послеоперационную ситуацию. Не прекращая перфузии, меняли 0,9% раствор NaCl на 12% раствор формалина.

Такую перфузионную фиксацию продолжали в течение 1-2 часов, после чего глазное яблоко на 1 сутки полностью погружали в формалин для окончательной фиксации. Далее проводили обезвоживание в спиртах, заключение в парафин и целлоидин. Гистологические срезы окрашивали гематоксилином-эозином, а также по Ван-Гизон, железным гематоксилином и резорцин-фуксином в модификации Харта (5% раствором фукселина в 1% солянокислом спирте) (Г.А. Меркулов, 1961).

На полученных препаратах изучали строение дренажной зоны глаза после непроникающей операции, в первую очередь - строение образованной в ходе препаровки фильтрующей мембраны и её связь с окружающими структурами.

А.В. Золотарёв
Похожие статьи
показать еще
 
Офтальмология